10186ES70 全血直接PCR試劑盒
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào) 10186ES70
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2022/2/9 15:18:46
- 訪問(wèn)次數(shù) 923
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企業(yè)簡(jiǎn)介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化技術(shù)為驅(qū)動(dòng)，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料,，從事分子、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā),、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè),，通過(guò)打通分子酶、蛋白,、抗體,、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開(kāi)發(fā)路徑,，成為國(guó)內(nèi)少數(shù)同時(shí)覆蓋三大品類生物試劑,、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)模化生產(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè),，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域,、診斷與檢測(cè)領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營(yíng)業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進(jìn)化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢(shì)和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗(yàn),，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良,、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線,。自公司成立以來(lái),，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過(guò)3000種,，涵蓋分子,、蛋白、細(xì)胞三大品類的生物試劑,，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購(gòu)需求,。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列,、逆轉(zhuǎn)錄系列,、核酸提取與純化系列,、PCR系列、分子克隆系列,、體外轉(zhuǎn)錄系列,、抗體、蛋白純化系列,、蛋白分析系列,、重組蛋白、細(xì)胞分析系列,、細(xì)胞培養(yǎng)系列,、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報(bào)告基因檢測(cè)系列等多個(gè)品類的生物試劑,，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究,、診斷檢測(cè)和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽(yù)資質(zhì)
翌圣生物通過(guò)申請(qǐng)商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力,，不斷加強(qiáng)公司品牌建設(shè),。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項(xiàng)（其中發(fā)明14項(xiàng),、實(shí)用新型1項(xiàng),、外觀設(shè)計(jì)3項(xiàng)）和45項(xiàng)與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊(cè)商標(biāo)權(quán)37項(xiàng)以及4項(xiàng)境外注冊(cè)商標(biāo),，是國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè),。
創(chuàng)新平臺(tái)
經(jīng)過(guò)多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開(kāi)展“產(chǎn)學(xué)研”合作,，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的湖北大學(xué),、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點(diǎn)研究基地的江南大學(xué)展開(kāi)合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達(dá)工藝,。翌圣生物以基因工程技術(shù),、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),、免疫學(xué)技術(shù),、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺(tái)——雙向分子酶理性設(shè)計(jì)與定向進(jìn)化平臺(tái),、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺(tái),、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺(tái)、高通量測(cè)序建庫(kù)試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺(tái),、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺(tái)和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺(tái),，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項(xiàng)核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白,、抗體,、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開(kāi)發(fā)路徑,，覆蓋技術(shù)研發(fā),、產(chǎn)品升級(jí)、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié),。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運(yùn)營(yíng)的工業(yè)化生產(chǎn)基地,，配有噸級(jí)發(fā)酵線、工業(yè)級(jí) AKTA 純化線和全自動(dòng)包裝線,。同時(shí),，公司通過(guò)了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證，從原料控制,、生產(chǎn)管理,、質(zhì)檢管控、倉(cāng)儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)葘?duì)生產(chǎn)線進(jìn)行360度管理監(jiān)督,，保證產(chǎn)品過(guò)程的可控制性及可追溯性,，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量,、高效及時(shí)的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可,，為檢測(cè)公司,、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室提供應(yīng)用于科學(xué)研究,、體外診斷,、基因測(cè)序、生物醫(yī)藥等的生物試劑,。與中國(guó)科學(xué)院,、清華大學(xué)、北京大學(xué),、復(fù)旦大學(xué),、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因,、恒瑞醫(yī)藥,、藥明康德、之江生物,、圣湘生物,、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定,、緊密的合作關(guān)系,，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science,、Cell等國(guó)際頂級(jí)期刊論文發(fā)表中,。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值，讓世界更健康更快樂(lè)
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動(dòng)產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價(jià)值,，讓世界更健康更快樂(lè)”的使命,，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級(jí)，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域,，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù),，助力我國(guó)打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時(shí),，翌圣生物將進(jìn)一步推進(jìn)國(guó)際化戰(zhàn)略,，繼續(xù)布局和拓展海外市場(chǎng)，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻(xiàn)力量,。
分子生物學(xué)試劑,，細(xì)胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑,，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR試劑盒 | 10186ES50 | 50 T | 323.00 |
Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR試劑盒 | 10186ES70 | 200 T | 983.00 |
產(chǎn)品描述
全血直接PCR試劑盒是一款可以直接對(duì)全血樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒,，無(wú)需DNA提取或樣品處理，大大降低了污染風(fēng)險(xiǎn),，縮短了檢測(cè)時(shí)間,。
試劑盒中包含配方優(yōu)化的2× Blood Master Mix，具有很強(qiáng)抑制物耐受性,，人血的模板大加入量可達(dá)45%,，鼠血的可達(dá)20%，可以靈敏的擴(kuò)增血液樣本中基因組和外源目的DNA篇段,。2× Blood Master Mix包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分,，擴(kuò)增產(chǎn)物末端加A，適用于Hieff Clone®快速克隆試劑盒（貨號(hào)：10907ES60/10908ES60）,。
該試劑盒可用于直接擴(kuò)增的血樣類型包括：新鮮血液,、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲(chǔ)存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干xue漬,，且兼容所有常規(guī)抗凝劑（EDTA,、檸檬酸鹽、肝素等）,。適用樣本來(lái)源包括人血,、鼠血、雞血、鳥(niǎo)血,、牛血,、狗血等。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
10186ES50（50T） | 10186ES70（200T） | ||
10186-A | 2× Blood Master Mixa | 500 µL | 1 mL× 2 |
a）2× Blood Master Mix：包含Taq DNA聚合酶,、dNTP混合物,、MgCl2、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑,、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等,，產(chǎn)品已混合溴酚藍(lán)染料（不含SDS），PCR產(chǎn)物可以直接進(jìn)行電泳,。
運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸,。-20℃保存。避免反復(fù)凍融,。
操作方法
1. PCR反應(yīng)體系配制
組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Blood Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
抗凝全血 | X | X | - |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
【注】：使用前務(wù)必充分混勻,，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
a）模板使用量：進(jìn)行基因組上的目的片段檢測(cè),，建議使用少量的血液量作為模板,；檢測(cè)血液樣本中某種病毒或細(xì)菌等的目的片段，建議擴(kuò)大PCR體系并使用較大量的血液模板,。血液模板多占PCR體系的45%（人血）,、20%（鼠血）。若模板使用含有血液的采集卡,，可截取直徑1-4 mm的血點(diǎn),，直接加入20-50 μL PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增。
b）引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM,，也可以根據(jù)情況在0.1-0.5 μM之間進(jìn)行調(diào)整,。
c）反應(yīng)體系：推薦使用20 μL或 50 μL,，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性,。
d）體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻,，瞬時(shí)離心將反應(yīng)液集于管底,。
2. PCR反應(yīng)條件設(shè)置
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
變性 | 95℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50℃～65℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】： a）預(yù)變性：95℃，5 min可以讓白細(xì)胞裂解,，釋放可用于PCR擴(kuò)增的基因組DNA,。請(qǐng)勿縮短時(shí)間或降低溫度。
b）退火溫度：退火溫度設(shè)置為引物Tm值即可,。然而,，使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴(kuò)增，并提高全血模板的擴(kuò)增效率。因此,，如擴(kuò)增產(chǎn)物特異性較差,，可以建立一個(gè)溫度梯度反應(yīng)去尋找引物模板適退火溫度。
c）延伸時(shí)間：按30 sec/kb設(shè)定,，如不足30 sec,，設(shè)置30 sec即可。
d）擴(kuò)增循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)已可以擴(kuò)增足量產(chǎn)物,。太多的循環(huán)將會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加,。
3. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析
PCR完成后，建議將反應(yīng)液于1000× g (大約4000 rpm) 離心1～3 min以沉淀血細(xì)胞碎片,，之后取上清進(jìn)行下游分析,。該步驟可有效去除多種血液組分。當(dāng)使用高濃度血液模板時(shí)此步尤為重要,，因?yàn)榻?jīng)過(guò)PCR循環(huán),，反應(yīng)管中會(huì)存在大量的血細(xì)胞碎片。這些碎片會(huì)干擾下游的檢測(cè),，如瓊脂糖電泳檢測(cè),。注意：由于血液本身的原因，PCR 結(jié)束后在 PCR 管的底部會(huì)出現(xiàn)透明凝膠狀物質(zhì),，此為正?，F(xiàn)象。
4. 對(duì)照反應(yīng)
在PCR結(jié)果分析時(shí),，不管是陽(yáng)性結(jié)果或陰性結(jié)果,，如果沒(méi)有對(duì)照反應(yīng)，都不能確定結(jié)果是否可靠,。為了便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析,，建議在進(jìn)行PCR時(shí)，設(shè)置陽(yáng)性和陰性PCR對(duì)照反應(yīng)以便于排除假陽(yáng)性或假陰性的干擾,。
4.1 陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Blood Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2 μM |
模板DNA | X | X | 100-200 ng |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
【注】：a）模板DNA：選用樣本純化的DNA,。
b）引物的選擇：建議選擇該樣本較易擴(kuò)增的基因的引物，如 β-actin 基因或 GAPDH 等,。
4.2 陰性對(duì)照
PCR反應(yīng)體系被污染會(huì)導(dǎo)致PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性,，需要設(shè)置陰性對(duì)照來(lái)排除。將使用的移液器槍頭浸泡在2× Blood Master Mix中,，添加引物,，ddH2O進(jìn)行PCR擴(kuò)增；另取ddH2O作為模板,，用目的基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,，以排除PCR體系是否被污染和實(shí)驗(yàn)是否有其他污染源,。
注意事項(xiàng)
1. 盡量使用新鮮抗凝血。若凍存血,，應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2. 解凍后2× Blood Master Mix可能出現(xiàn)渾濁，冰上放置1-2 min,，待溶液澄清后,，上下顛倒混勻，不影響試劑性能,。
3. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi),，以便擴(kuò)增效率*。
4. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
常見(jiàn)問(wèn)題與解決方法
常見(jiàn)問(wèn)題 | 可能原因 | 解決方法 |
陽(yáng)性對(duì)照、待測(cè)樣本均無(wú)條帶,。 | PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適,。 | 使用梯度PCR摸索PCR *反應(yīng)條件。 |
PCR試劑保存不當(dāng)失去活性,。 | 2× PCR Mix應(yīng)保存于-20℃,，使用時(shí)避免反復(fù)凍融。若使用頻繁,，可在4℃短時(shí)間存放,。 | |
引物設(shè)計(jì)問(wèn)題。 | 嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查,。 | |
陽(yáng)性對(duì)照有目的條帶,，待測(cè)樣本無(wú)條帶或條帶弱。 | 血液樣本保存不當(dāng),，基因組DNA降解,。 | 抗凝全血可在4℃保存2-8天，需長(zhǎng)時(shí)間保存可將樣本置于在-20℃或-70℃凍存,，并避免反復(fù)凍融,。 |
模板加入量不適合。 | 可在PCR體系10%-30%范圍內(nèi)優(yōu)化血液加入量,；若是擴(kuò)增血液樣本中的病毒或細(xì)菌DNA篇段,，可將模板量增加至30%-40%,。 | |
PCR循環(huán)數(shù)不足,。 | 適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳,。因?yàn)槟０鍙?fù)雜,，一般PCR反應(yīng)要比用純化的 DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳,。 | |
非特異性擴(kuò)增 | PCR退火溫度太低，循環(huán)數(shù),、引物濃度或模板濃度太高,。 | 增加PCR退火溫度，降低PCR循環(huán)數(shù),、引物濃度或模板濃度,。 |
PCR引物錯(cuò)配。 | 重新設(shè)計(jì)PCR引物,。 | |
配制PCR反應(yīng)體系時(shí)溫度太高或配制完成后放置時(shí)間太久,。 | PCR反應(yīng)體系的配制在低溫下進(jìn)行，配制完成后盡快進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),。 | |
陰性對(duì)照出現(xiàn)目的條帶 | 操作工具或試劑污染,。 | 實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔,，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外,。 |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Animal Tissue Direct PCR Kit 動(dòng)物組織直接PCR試劑盒 | 10180ES50/70 | 50/200 T | 383/1353 |
Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠組織直接PCR試劑盒HOT | 10181ES50/70 | 50/200 T | 293/883 |
Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒 | 10182ES50/70 | 50/200 T | 293/883 |
Plant Tissue PCR Kit 植物組織直接PCR試劑盒HOT | 10183ES50/70 | 50/200 T | 353/1213 |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 動(dòng)物組織直接PCR試劑盒 | 10184ES50/70 | 50/200 T | 433/1453 |
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠組織直接PCR試劑盒 | 10185ES50/70 | 50/200 T | 323/983 |
Plant Tissue PCR Kit (With Dye) 植物組織直接PCR試劑盒 | 10187ES50/70 | 50/200 T | 393/1353 |
HB190220
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