蛋白質羰基含量測定試劑盒

可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

蛋白質羰基是多種氨基酸在蛋白質的氧化修飾過程中的早期標志,，其含量高低表明蛋白質氧化損傷程度的大小,，是衡量蛋白質氧化損傷的主要指標。

測定原理

羰基與 2,4-二硝基苯肼反應生成紅色 2,4-二硝基苯腙,，在370nm 處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平,、恒溫水浴鍋,、低溫離心機、漩渦震蕩儀,、可見分光光度計,、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水,，無水乙醇，乙酸乙酯,。

試劑組成和配制

提取液：液體 50mL×1 瓶,，4℃保存。

試劑一：粉劑 0.1g×5支,，4℃避光保存,。（使用前根據(jù)樣品數(shù)，每支加1mL 水溶解,，每支為10 個樣品用量）

試劑二：液體 20mL×1 瓶,，4℃避光保存。

試劑三：液體 20mL×1 瓶,，4℃保存,。

試劑四：液體 25mL×1 瓶，4℃保存,。

試劑五：根據(jù)測定樣品量,，將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。

試劑六：液體 100mL×1 瓶,，4℃保存,。

樣品處理

1. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿,，于4℃,，4000g 離心10min，取上清,，加入 0.1mL試劑一,，室溫放置 10min，4℃,，10000g 離心 10min,，取上清待測。

2. 細菌,、真菌：按照細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒,，間隔7秒,，總時間 3min）；然后 10000g,，4℃,，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體樣本：直接測定,。

測定步驟和操作表