Heat Shock Proteins-72 ELISA KIT（ELISA試劑盒）

Heat Shock Proteins-72 ELISA KIT（ELISA試劑盒）樣品收集、處理及保存方法：血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。檢測對象:人血清/血漿及相關(guān)液體實驗方法:雙抗原夾心法進(jìn)行測

ELISA試劑分類: RD試劑盒,，GBD試劑盒,，IBL試劑盒

  2、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
  3,、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4,、 保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

上海乾思生物科技代理**進(jìn)口試劑盒,，經(jīng)銷眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的ELISA試劑盒,，生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)品,，抗體,，培養(yǎng)基，血清,，為中國科研試劑供應(yīng)商之一,，質(zhì)量被全國各大院校科研機(jī)構(gòu)認(rèn)可,，
并為Elisa試劑盒長期供應(yīng)商.

上海乾思生物科技有限公司特別供應(yīng)進(jìn)口分裝elisa檢測試劑盒,，規(guī)格48T/96T，2-8℃保存,，快遞運輸,。上海乾思生物成立于2007年，生產(chǎn)經(jīng)營進(jìn)口分裝的試劑盒產(chǎn)品,，有人試劑盒,、大鼠試劑盒、小鼠試劑盒,、雞試劑盒,、鴨試劑盒、豚鼠試劑盒、牛試劑盒,、兔子試劑盒、羊試劑盒,、山羊試劑盒,、綿羊試劑盒、魚試劑盒,、豬試劑盒,，并且提供試劑盒代測技術(shù)服務(wù)等。

乾思生物科技有限公司

Shanghai biobaiye Biotech Co.,Ltd

供應(yīng)人elisa試劑盒,、大鼠elisa試劑盒,、小鼠elisa試劑盒、兔elisa試劑盒等,。標(biāo)本有：血清,、血漿、細(xì)胞上清液,、尿液,、體液、灌洗液,、腦脊髓,、心房水、胸房水,、組織等,。

種屬：人、大鼠,、小鼠,、兔子、豬,、犬,、猴、馬,、牛,、羊、雞,、鴨,、魚等。

常用生化試劑作用：   

1,、蛋白酶K：能水解消化蛋白質(zhì),，特別是與DNA結(jié)合的組蛋白，在尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml,，推薦反應(yīng)緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2,。

2、SDS：十二烷基硫酸鈉,，溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜，并解離細(xì)胞中的核蛋白,，SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀,。

3、IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,， 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等,。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似，所以它和乳糖一樣,，可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,，

使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化，四聚體解聚成單體,，失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,，從而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類,。與乳糖不同的是,，

IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選,。作用*的誘導(dǎo)劑,，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定。

4,、X-gal：5-溴-4-氯,。

樣品收集、處理及保存方法：血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。檢測對象:人血清/血漿及相關(guān)液體實驗方法:雙抗原夾心法進(jìn)行測

ELISA試劑分類: RD試劑盒,，GBD試劑盒，IBL試劑盒

  2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
  3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4,、 保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

上海乾思生物科技代理**進(jìn)口試劑盒,，經(jīng)銷眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的ELISA試劑盒，生化試劑,，標(biāo)準(zhǔn)品,，抗體，培養(yǎng)基,，血清,，為中國科研試劑供應(yīng)商之一，質(zhì)量被全國各大院?？蒲袡C(jī)構(gòu)認(rèn)可,，
并為Elisa試劑盒長期供應(yīng)商.

上海乾思生物科技有限公司特別供應(yīng)進(jìn)口分裝elisa檢測試劑盒，規(guī)格48T/96T,，2-8℃保存,，快遞運輸。上海乾思生物成立于2007年,，生產(chǎn)經(jīng)營進(jìn)口分裝的試劑盒產(chǎn)品,，有人試劑盒、大鼠試劑盒,、小鼠試劑盒,、雞試劑盒、鴨試劑盒,、豚鼠試劑盒,、牛試劑盒、兔子試劑盒,、羊試劑盒,、山羊試劑盒、綿羊試劑盒,、魚試劑盒,、豬試劑盒，并且提供試劑盒代測技術(shù)服務(wù)等。

乾思生物科技有限公司

Shanghai biobaiye Biotech Co.,Ltd

供應(yīng)人elisa試劑盒,、大鼠elisa試劑盒,、小鼠elisa試劑盒。

注：
1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,，使用后請立即按照說明書要求保存試劑,。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染,。
2.   加樣：加樣或加試劑時,，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時,，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣,。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā),；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度,。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù),。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底,。標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差,；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘),，如顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù),。
7.  底物：底物請避光保存,，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定,，計算時請后乘以稀釋倍數(shù),。
洗板方法
1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次,。
2.  自動洗板：如果有自動洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo)),，OD值為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo)),，在對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,，如curve expert 1.3,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。
 ◇      注意事項：
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,，儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復(fù)凍融,。標(biāo)本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月,。-70度可保存6個月,。部分標(biāo)本需添加抑肽酶。
◇      液體類標(biāo)本
標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿,。每個標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測種類,。
◇      血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。收集上清,。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
◇      血漿：
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      尿液、胸腹水,、腦脊液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶),。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存,，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
寄標(biāo)本時需注明以下情況：
標(biāo)本編號；2,、所測項目,；3,、是否做復(fù)孔