SF17A昆蟲細胞無血清培養(yǎng)基*

品名：SF17A昆蟲細胞無血清培養(yǎng)基

貨號：SF10105-2

規(guī)格：1L

價格：270元

產(chǎn)品介紹：

SF17A是一種適于昆蟲細胞培養(yǎng)的無血清無蛋白培養(yǎng)基,，含有Pluronic F-68,、谷氨酰胺、碳酸氫鈉,。針對Sf9 ,、Sf21和High-Five 昆蟲細胞系的無血清培養(yǎng)而開發(fā)和優(yōu)化,，適于通過昆蟲細胞桿狀病毒表達系統(tǒng)表達外源蛋白，使用該培養(yǎng)基可獲得高滴度野生型AcNPV,。細胞可以從無血清或者添加血清的培養(yǎng)基中直接轉移到SF17A中進行傳代培養(yǎng),，而無需經(jīng)過適應。該培養(yǎng)基可以支持Sf9,、Sf21和High-Five 細胞貼壁或者懸浮生長,。Sf9 、Sf21和High-Five 細胞在SF17A培養(yǎng)基中通?？梢赃_到1×10 7 cells/ml 的細胞密度,，細胞活性大于95%，傳代超過20 次而細胞活性不降低,。

細胞復蘇：

1.迅速將凍存的細胞放入37 度水浴中（<1min）,。

2.將凍存管中的細胞轉移到合適的培養(yǎng)容器中，用預熱過的培養(yǎng)基將細胞稀釋至0.5～0.8×106 cells/ml,。

3.將細胞放入生化培養(yǎng)箱（無濕度,、二氧化碳控制）中的搖床上，27±0.5°C ,，90～120 rpm,。

4.當細胞密度達到2×106 cells/ml 以上時進行傳代培養(yǎng)。建議在蛋白或者病毒制備前細胞應至少傳代三次以上,。

細胞懸浮培養(yǎng)傳代

昆蟲細胞對剪切力非常敏感,，必須保證攪拌培養(yǎng)過程中槳葉不能與容器壁或者容器底部接觸。

1.使用自動或者半自動細胞計數(shù)儀,，或者手動計數(shù)的方法測定細胞密度,。

2.向無菌容器中加入預熱的培養(yǎng)基，將細胞按照0.5～0.8×106 cells/ml 的密度接種其中（125ml 的搖瓶可以接種20～30 ml,，100 ml 的轉瓶（spinner bottle）可以接種50～75 ml）,。

3.培養(yǎng)箱溫度27±0.5°C ，不需要濕度和二氧化碳控制,。

4.搖床轉速90-120 rpm,，轉瓶攪拌轉速設定為60～95 rpm（因儀器參數(shù)不同，建議在培養(yǎng)時對轉速進行優(yōu)

化）,。

5.當細胞密度達到2×106 cells/ml 以上時,，可以進行傳代。

注意：如果觀察到培養(yǎng)物中有細胞碎片,，建議將細胞懸液100 g 離心5～10 min,，棄上清，用新鮮培養(yǎng)基將細胞重懸,，這樣可減少細胞碎片和代謝副產(chǎn)物的積累,。

注意：建議控制細胞培養(yǎng)代次,，每隔一段時間需要重新復蘇一支低代次的細胞

細胞貼壁培養(yǎng)傳代

1.當細胞達到80~90%匯合度時，將培養(yǎng)上清去除,。

2.添加4 mL 預熱培養(yǎng)基（25 cm2）,，反復吹打制備細胞懸液。

3.觀察細胞是否全部脫落,。

4.如果部分細胞結團,，將全部細胞轉移到離心管中，靜止1~2 min,，細胞團會沉降到離心管的底部,。用槍頭輕輕碾壓細胞團促使細胞分散。如果細胞團比較大,，可以重以上步驟,。用槍頭吹打過重會造成細胞活性降低。

5.計數(shù)細胞密度,。

6.按照2~8×104 cells/cm2 的密度接種到新培養(yǎng)瓶中,，培養(yǎng)基按照5 mL/cm2 的量進行添加。

7.置于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，27±0.5°C ,，不需要濕度和二氧化碳控制。

8.培養(yǎng)三天后將培養(yǎng)上清去除,，靠近方瓶一側將新鮮培養(yǎng)基緩慢添加到方瓶中,。

注意：Sf9 細胞為非貼壁依賴型細胞，可以在貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)兩種培養(yǎng)模式之間進行多次轉換,，而且細胞活性,、形態(tài)和生長速率基本無區(qū)別。

將細胞適應至SF17A培養(yǎng)基中,，在適應過程中,，細胞活性非常重要，必須不低于90%,，并處于對數(shù)生長中期,。

直接懸浮適應

單層培養(yǎng)的細胞，只需要在傳代時直接將培養(yǎng)基更換為SF17A,。

按照以下步驟將懸浮培養(yǎng)的細胞轉移至該培養(yǎng)基中：

1.將細胞懸液100×g 離心5～10 min,，將上清去除。

2.使用預熱過的SF17A培養(yǎng)基將細細胞重懸,，細胞密度不低于8×105 cells/mL，轉移至合適的容器中進行

培養(yǎng),。

3.置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),，監(jiān)測細胞生長情況,。

逐步適應

按照貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)傳代方法和以下方法進行逐步適應。

1.在適應過程中細胞密度不低于0.8×106 cells/mL,。

2.在傳代培養(yǎng)過程中逐步增加SF17A培養(yǎng)基的比例,，SF17A培養(yǎng)基與初始培養(yǎng)基的比例逐漸升高（25:75，

50:50,，75:25,，全部的SF17A）。在某個比例培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)有可能要多次傳代培養(yǎng),。

細胞凍存

1.準備處于對數(shù)生長中期的細胞,，細胞活性>90%。

2.確定需要的細胞數(shù)量和凍存液體積,，凍存液中細胞密度應達到0.5～1.0 × 107 cells/ml,。

3.凍存液由82.5%SF17A，7.5% DMSO,，10% 胎牛血清組成（血清也可以不添加）,。凍存液4°C 保存。

4.將培養(yǎng)物100 g 離心6 min,，去除上清,，使用凍存液重懸細胞。

5.根據(jù)培養(yǎng)規(guī)模將細胞分裝于合適的凍存管中,，如4.5 ml～5.0 ml/支,。

6.細胞可以在液氮中長期穩(wěn)定保存，但不確定長保存期限,。

SF17A昆蟲細胞無血清培養(yǎng)基*貨號及規(guī)格：

液體：

SF17A培養(yǎng)基,，1L 液體，SF10105-2__