高分辨率熒光顯微鏡

規(guī)格及參數(shù)：

1、數(shù)據(jù)獲取分析：

2,、操作參數(shù)：

3,、硬件參數(shù)：

Nanoimager技術(shù)特征 

是一種新型的單分子顯微鏡，也是目前單一一款無需校準(zhǔn),、無需光學(xué)平臺,、超小型臺式超分辨顯微鏡。Nanoimager突破了傳統(tǒng)光學(xué)的衍射極限,，分辨率可達(dá)20nm,，是*臺大視野單分子FRET顯微鏡。Nanoimager簡單易用,、設(shè)計(jì)緊湊,，使用安全無害的一級激光，用戶在普通的實(shí)驗(yàn)室桌面上即可獲得高分辨率的單分子熒光圖像 ,。適用于單分子示蹤,、活細(xì)胞成像、蛋白互作,、3D成像等研究,。

超高分辨率熒光顯微鏡

Nanoimager顯微鏡設(shè)計(jì) 

♦    Nanoimager具有和傳統(tǒng)顯微鏡不同的特殊設(shè)計(jì),。傳統(tǒng)顯微鏡需要集成單分子檢測功能的配件，同時(shí)也會帶來配件的限制性,，而Nanoimager是專門為單分子超分辨成像而設(shè)計(jì)，為了達(dá)到更高的效率而移除了多余的成像元件,；
♦    配置更加安全的一級激光,Nanoimager可在任何辦公室,、實(shí)驗(yàn)室和教室使用。相對于放置于暗室的大型顯微鏡,， Nanoimager更加方便用戶的使用,；
♦    Nanoimager的顯微鏡單位面積小于A4紙；配套的激光器通過光纖連接至顯微鏡,；

♦    與定制的顯微鏡和傳統(tǒng)的顯微鏡設(shè)計(jì)不同,， Nanoimager始終保持校準(zhǔn)狀態(tài)。樣品準(zhǔn)備好后可以直接成像,，無需花費(fèi)時(shí)間進(jìn)行調(diào)試和校正,。
♦    Nanoimager的封閉式系統(tǒng)能夠防止偏移發(fā)生并阻止灰塵和其他污染物進(jìn)入，可以一直保持在正常工作狀態(tài),。作為一款臺式機(jī),， Nanoimager不需要傳統(tǒng)顯微鏡昂貴的配套設(shè)施，無需額外配置溫控房間,、光學(xué)平臺,、激光室或暗室。 

超高分辨率熒光顯微鏡

Nanoimager技術(shù)原理 

Nanoimager采用PALM/dSTORM技術(shù),，利用單分子定位算法并結(jié)合光學(xué)系統(tǒng)艾里斑的形狀,，以超高精度（納米量級）獲得熒光分子的中心位置，然后用CCD將其信號進(jìn)行采集轉(zhuǎn)化得到分辨率為20nm的超分辨圖像,。

成像模式 

相對于普通的Epifluorescence(EPI)/模式,，Nanoimager有total internal reflection fluorescence (TIRF)/ highly inclined and laminated optical sheet (HILO)兩種模式可自由切換。

EPI：激發(fā)較厚的樣品（＞10um）,，信號噪聲強(qiáng),，即傳統(tǒng)模式。

TRIF：激發(fā)薄層樣品（＜200nm）,，信號噪聲弱,，適用于膜表面成像。

HILO：激發(fā)樣品厚度（＜10um）,，信號噪聲較弱,，適用于大部分成像。

應(yīng)用領(lǐng)域

單分子示蹤	單分子成像	蛋白質(zhì)相互作用
蛋白質(zhì)組裝	表觀遺傳學(xué)	DNA納米定位
單分子定位	單分子FRET	外泌體

應(yīng)用案例

1,、單分子FRET 

    Nanoimager是目前*臺用于大視野單分子熒光共振能量轉(zhuǎn)移(smFRET)的商業(yè)化儀器,。 FRET是一種兩個(gè)熒光分子間非輻射性的能量轉(zhuǎn)移方式,，反映兩者的分子間距。 FRET一般在2 – 10 nm的間距發(fā)生,。 smFRET研究中,，作為供體的熒光分子由激光激發(fā)，將能量轉(zhuǎn)移至臨近的受體熒光分子,。被激發(fā)的受體將能量以熒光形式發(fā)散,。供體與受體可以連接至同一個(gè)或者不同的分子。 

    smFRET可以用于測量核酸或者單個(gè)蛋白分子的分子內(nèi)距離,，也可以用于研究蛋白亞基間的相互作用,；還可應(yīng)用于研究藥物對于酶結(jié)合位點(diǎn)的構(gòu)象動力學(xué)的作用，或是神經(jīng)退行性疾病中蛋白的聚集,。 smFRET可以用于在單分子層面推到結(jié)合常數(shù),、反應(yīng)途徑與停滯時(shí)間而不受總體平均值干擾。 

     Nanoimager適用于smFRET的關(guān)鍵功能包括：同時(shí)雙色成像,；單分子散射光強(qiáng)度和總體平均的實(shí)時(shí)分析,；視野中數(shù)千個(gè)單分子的高通量成像，以及用交替熒光激發(fā) (ALEX) smFRET的功能來定量化學(xué)計(jì)量與FRET效率,。圖4是smFRET用于研究單個(gè)DNA霍利迪交叉的動力學(xué),。 

用smFRET檢測霍利迪交叉(HJs)的實(shí)時(shí)構(gòu)象變化

 2、單分子示蹤

    Nanoimager可以在兩個(gè)通道同時(shí)示蹤細(xì)胞或者純化物樣品中的單分子 (圖5),，并計(jì)算擴(kuò)散系數(shù),。細(xì)胞中分子的擴(kuò)散系數(shù)可以被示蹤，如酶或蛋白可以通過藥物和抗生素的反應(yīng)來示蹤,。低擴(kuò)散率可以表示標(biāo)記分子與另一分子或結(jié)構(gòu)的相互作用或相結(jié)合,。同時(shí)示蹤兩種標(biāo)記了不同熒光分子的分子可以確定兩者動態(tài)相互作用的水平。 

    Nanoimager可以直接反映純化樣品中熒光粒子的擴(kuò)散率和預(yù)估大小,，具有敏感性 (單熒光分子級別) 和特異性 (雙色標(biāo)記可以顯著降低檢測雜質(zhì)的可能性),。 

Nanoimager雙色追蹤單分子/粒子

3、使用Nanoimager成像—更大的視野

    Nanoimager的每個(gè)成像通道均有50 µm x 80 µm的大視野,，而其他大部分單分子顯微設(shè)備只有20µm x 20 µm的視野,。視野中照明均勻，可以實(shí)現(xiàn)單分子或細(xì)胞的高通量成像并快速收集數(shù)據(jù),。
    下圖顯示了以10倍于其他技術(shù)的速度對突變的大腸桿菌細(xì)胞的不同表型進(jìn)行成像,。為了獲得不同表型的可靠的結(jié)果，需要對大量細(xì)胞進(jìn)行比較,。使用具有大視野,，能夠自動對焦和自動獲取數(shù)據(jù)的Nanoimager可以顯著加快整個(gè)實(shí)驗(yàn)速度和通量。將大視野與超分辨成像結(jié)合是Nanoimager的*優(yōu)勢,。 

規(guī)格及參數(shù)：

1,、數(shù)據(jù)獲取分析：

2、操作參數(shù)：

3,、硬件參數(shù)：