植物過氧化氫酶（CAT）酶聯(lián)免疫試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定植物組織,，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中過氧化氫酶（CAT）活性,。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物過氧化氫酶（CAT）水平。用純化的植物過氧化氫酶（CAT）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化氫酶（CAT），再與 HRP 標(biāo)記的過氧化氫酶（CAT）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的植物過氧化氫酶（CAT）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中植物過氧化氫酶（CAT）活性濃度,。

操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。 

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30分鐘。

4. 配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用 

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30秒后棄去,，如此重復(fù) 5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5,。 

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色 15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 

操作程序總結(jié)：  

 計算

 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度,。

 注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間 控制在 5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計 算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。 

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。 

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。 

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn),。

 保存條件及有效期 

1．試劑盒保存：；2-8℃,。 

2．有效期：6個月