小鼠雜交瘤細胞,;3H8H10培養(yǎng)
- 公司名稱 上海研生實業(yè)有限公司
- 品牌 ATCC
- 型號
- 產(chǎn)地 進口/國產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2018/5/7 13:35:26
- 訪問次數(shù) 365
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細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞;3H8H10培養(yǎng)
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
品牌 半貼壁生長
特征特性 可產(chǎn)生單克隆抗體,。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:
3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C30
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
小鼠雜交瘤細胞,;3H8H10培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,,以免中和后加入的消化液,,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,,按此比例進行消化,,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,,加入2-3ml*培養(yǎng)基后,,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61),。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化,。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),,在37℃,、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng),。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,,用0.25%胰酶消化1~2min,,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮,、分散,,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,,然后加入倍量的培養(yǎng)基,,溫和混勻,吸管分裝混合液,,傳代擴增細胞,。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,,待細胞變圓,、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液,。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),,按公式計算出細胞數(shù),。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,,取其平均值,,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率,。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基,。每天隨機取3孔,,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,,繪制細胞生長曲線
Anti-NF-66/a-Internexin/FITC 熒光素標記α-中連蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-VIP/FITC 熒光素標記血管活性腸肽抗體蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
ADP核糖基化因子6抗體 Anti-ARF6 0.2ml
Goat Anti-human IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的羊抗人IgM 0.1ml
GPR30 英文名稱: G蛋白偶聯(lián)受體GPR30蛋白抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh PRKAG2/AMPKγ2 腺苷單磷酸活化蛋白激酶γ2抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-VIP/FITC 熒光素標記血管活性腸肽抗體蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
MDA(Human malondialchehyche) ELISA Kit 人丙二醛Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-IASPP 細胞凋亡ASPP家族的另一個成員抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MAPK11/p38Beta 原活化的蛋白激酶p38β抗體 規(guī)格 0.1ml
WARS(Human tryptophanyl-tRNA synthetase) ELISA Kit 人色酰tRNA合成酶 96T
RIP5 英文名稱: 受體結合絲酸蘇酸激酶5抗體 0.2ml
C7orf26 英文名稱: 7號染色體開放閱讀框26抗體 0.2ml
Anti-IASPP 細胞凋亡ASPP家族的另一個成員抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
RANKL (Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa B ligand) ELISA Kit 兔核因子κB受體活化因子配基 96T
Metallothionein 3 英文名稱: 金屬硫蛋白3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh EEF2k 真核延伸因子激酶2抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse lymphocyte factor ELISA Kit 小鼠淋巴細胞因子Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
phospho-ATF2(Thr71) 英文名稱: 磷酸化活化復制因子2抗體 0.1ml
Anti-CCL15/MIP5/FITC 熒光素標記巨噬細胞炎性蛋白15IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-DAPK3/FITC 熒光素標記凋亡相關蛋白激酶3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Anti-Ly-6G/FITC 熒光素標記淋巴細胞抗原6G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh CAP57 中性粒細胞殺菌蛋白BP30抗體 規(guī)格 0.2ml
DCX(Doublecortin) 雙皮質(zhì)素抗原 0.5mg
HERPUD1 英文名稱: MMF誘導片段蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh SH2B1 SH2B蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Anti-Ly-6G/FITC 熒光素標記淋巴細胞抗原6G抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),,加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入*培養(yǎng)基,,輕輕吹勻后,,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是,,在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同,。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。