結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào)：BC3295

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×1瓶,，4℃保存,；

試劑一：30mL×1瓶，4℃保存,；

試劑二：粉劑×1瓶,，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶,，-20℃保存,；

試劑四：粉劑×2瓶，4℃保存,；臨用前加入5mL試劑一充分混勻備用,；

試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存,；臨用前加入10mL試劑一充分混勻備用,；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存,；臨用前加入500μL雙蒸水,，充分溶解備用,；

試劑七：液體250μL×2支，-20℃保存,；

試劑八：液體12.5μL×2支,；每支臨用前加入溶解好的4mL試劑四。

反應(yīng)液Ⅰ的配制：臨用前在試劑二中加入14mL試劑一,，緩慢加熱,，逐漸升溫使其溶解，冷卻后將其加入試劑三混合溶解,。這樣可以分兩批配制并且測(cè)定,。

產(chǎn)品說(shuō)明：

   GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng),，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成,。

   GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP,；進(jìn)一步通過(guò)反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶,、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP⁺還原為NADPH,，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比,，通過(guò)340nm下測(cè)定NADPH的增加量，可以計(jì)算GBSS活性,。

需自備的的儀器和用品：

   紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽,、冰和蒸餾水,。

操作步驟：

一、粗酶液制備

   稱取約0.1g組織加入1mL提取液,，冰浴中勻漿,。10000g ，4℃離心10min,，棄上清,，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上待測(cè),。

二,、測(cè)定步驟

   1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)340nm,，蒸餾水調(diào)零,。

   2、在EP管中按順序加入下列試劑

混勻后立即轉(zhuǎn)移200μL微量石英比色皿或96孔板中,， 340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2,，計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意：試劑二如有沉淀,，加入之前要使之充分溶解混勻,。

三、GBSS活性計(jì)算

a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：

1,、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

   單位的定義：每mg組織蛋白在1mL反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。

   GBSS活性（U/mg prot）= [ΔA÷（ε×d）×V測(cè)]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2,、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在1mL反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。

GBSS活性（U/g 鮮重）=[ΔA÷（ε×d）×V測(cè)×10⁹]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T= 432×ΔA÷W 。

V測(cè)：測(cè)量體積,，0.26m L,；V樣：加入樣本體積，0.1m L,；V反總：反應(yīng)體積,，0.31mL；V上清：加入上清液體積,，0.15mL,；V提取：加入提取液體積,，1×10^-3 L,；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10^-3mL/nmoL/cm,；d：比色皿光徑,，1cm,；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣品質(zhì)量,，g,。

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。

GBSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V測(cè)]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T =720×ΔA÷Cpr,。

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2,、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。

GBSS活性（U/g 鮮重）=[ΔA÷（ε×d）×V測(cè)]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T=720×ΔA÷W。

V測(cè)：測(cè)量體積,，0.26m L,；V樣：加入樣本體積，0.1m L,；V反總：反應(yīng)體積,，0.31mL；V上清：加入上清液體積,，0.15mL,；V提?。杭尤胩崛∫后w積,，1×10^-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù),，6.22×10^-3mL/nmoL/cm,；d：比色皿光徑，1cm,；T：反應(yīng)時(shí)間,，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣品質(zhì)量，g,。

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法訂購(gòu)說(shuō)明：

1,、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。
2,、部分非常用產(chǎn)品,，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂,。
3,、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn),。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,，部分城市可到17點(diǎn)整,，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5,、請(qǐng)辦理完貨款后,，將底單等連同收貨人的地址、姓名,、等以傳真,、、短信,、等形式通知我們,。

運(yùn)輸說(shuō)明：

極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái),，再用泡沫盒密封,，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子,，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái),，再使用泡沫盒密封,，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周）,，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中,。