SYSY

上海乾思生物SYSY品牌代理專業(yè)經(jīng)營進(jìn)口胎牛血清,、細(xì)胞因子,、ELISA試劑盒、細(xì)胞,、抗體,、生物試劑、耗材,、培養(yǎng)基,、一抗、二抗,、其產(chǎn)品吸附均勻,，吸附性好，空白值低,，孔底透明度高,，代做ELISA實(shí)驗(yàn)等。完善的庫存及供應(yīng)體系以及高效穩(wěn)定的純化技術(shù),，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)和產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性,。

怎樣查到一個(gè)特定細(xì)胞株的相關(guān)知識和培養(yǎng)條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料,。打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接,，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述,，包括細(xì)胞的來源,，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料,。
如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基,？
培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長,。總之,，*MEM,、DMEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng)；RPMI1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng),；各種目的無血清培養(yǎng)*AIMV培養(yǎng)基（SFM）,。

測序?qū)嶒?yàn)流程：
1 收集樣品
2 相關(guān)試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預(yù)混試劑),。
3 實(shí)驗(yàn)儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機(jī)。
4 總RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機(jī)引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系,?；靹蚝?0℃變性RNA 5分鐘，冰上速冷1分鐘,，離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系,。PCR儀中反應(yīng)條件設(shè)置 37℃延伸60min，70℃保溫15min終止反應(yīng),。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>6 引物設(shè)計(jì)與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實(shí)時(shí)定量PCR 按以下反應(yīng)體系進(jìn)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase,、SYBR Green I、Optimized PCR buffer,、5mM MgCI2,、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul，下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul,。定量PCR儀擴(kuò)增反應(yīng)條件設(shè)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(gè)循環(huán)),。
8 PCR產(chǎn)物溶解曲線分析 將所擴(kuò)增的PCR 產(chǎn)物進(jìn)行溶解曲線分析，單峰溶解曲線表示擴(kuò)增產(chǎn)物單一,，無非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物,。溶解曲線生成的反應(yīng)程序?yàn)? 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。