馬維生素A(VA)ELISA試劑盒；Horse Vitamin A,VA ELISA Kit樣品收集,、處理及保存方法：
1）血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，10×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2）血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能
不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實(shí)驗(yàn)步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 將待做切片置于切片架上,，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr,；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ,、Ⅱ、Ⅲ）,，每次
10 min,；
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無(wú)水乙醇 5min,，95%乙醇 2 次（每次 2min）,，85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min,，自來(lái)水沖洗,，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說(shuō)明書*方法進(jìn)行抗原修復(fù),，常采用高壓,、微波（溫
度達(dá)到 98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻,，自來(lái)水沖洗,，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復(fù),，
直接進(jìn)入第 5 步封閉,。
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min,；
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗）,，37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過(guò)夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）,；
8.封閉： 滴加試劑 B,，37℃濕盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D）,，37℃濕盒中孵育
30 min,；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20,，37℃濕盒孵育封閉 20 min,；
12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM）,，37
℃濕盒中孵育 30 min,；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）,；
14.顯色：應(yīng)用 DAB 溶液（試劑 F）顯色,；
15.復(fù)染：自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水,，透明,；
16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片,；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像,。
馬維生素A(VA)ELISA試劑盒；Horse Vitamin A,VA ELISA Kit操作注意事項(xiàng)：
1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
2）實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時(shí),，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6）洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7）底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子,。底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8）加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
9）按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，*使用排槍加樣,。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
10. 如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn),。
馬維生素A(VA)ELISA試劑盒,；Horse Vitamin A,VA ELISA Kit保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6 個(gè)月