馬維生素A(VA)ELISA試劑盒；Horse Vitamin A,VA ELISA Kit樣品收集、處理及保存方法：
1）血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，10×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2）血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能
不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 將待做切片置于切片架上,，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ,、Ⅱ,、Ⅲ），每次
10 min,；
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化,，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min）,，85%
乙醇 2 min,；75%乙醇 2min，自來水沖洗,，ddH2O 洗 2×2min,；
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說明書*方法進行抗原修復(fù)，常采用高壓,、微波（溫
度達到 98~100℃）或酶消化修復(fù)法,，室溫自然冷卻，自來水沖洗,，ddH2O 洗 2×
2min,，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復(fù),，
直接進入第 5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑 B,，37℃濕盒孵育 30 min,；
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜,；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）,；
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min,；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D）,，37℃濕盒中孵育
30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）,；
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20,，37℃濕盒孵育封閉 20 min；
12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200,，終濃度 5~20 nM）,，37
℃濕盒中孵育 30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）,，TBS 洗滌（2×5 min）,；
14.顯色：應(yīng)用 DAB 溶液（試劑 F）顯色；
15.復(fù)染：自來水充分沖洗,，復(fù)染,，脫水，透明,；
16.封片： 待組織標(biāo)本干后,，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像,。
馬維生素A(VA)ELISA試劑盒,；Horse Vitamin A,VA ELISA Kit操作注意事項：
1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
2）實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7）底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應(yīng)*,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
9）按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn),。
馬維生素A(VA)ELISA試劑盒；Horse Vitamin A,VA ELISA Kit保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月