化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專(zhuān)用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑>CP912446 戈氏放線(xiàn)菌PCR試劑免費(fèi)代測(cè)
CP912446 戈氏放線(xiàn)菌PCR試劑免費(fèi)代測(cè)
- 公司名稱(chēng) 上海一研生物科技有限公司
- 品牌 DSMZ
- 型號(hào) CP912446
- 產(chǎn)地 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
- 更新時(shí)間 2019/10/25 11:17:29
- 訪(fǎng)問(wèn)次數(shù) 887
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供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 50T |
---|---|---|---|
貨號(hào) | CP912446 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅用于科研 |
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,,-20℃保存,有效期一年,。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí),,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分,。在專(zhuān)門(mén)的區(qū)域操作,。本試劑盒不但準(zhǔn)確、快速,、靈敏,,還具有以下
產(chǎn)品名稱(chēng) | 戈氏放線(xiàn)菌PCR試劑免費(fèi)代測(cè) |
英文名稱(chēng) | Actinomyces gerencseriaePCR |
分類(lèi) | PCR檢測(cè)試劑盒 |
特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,,用戶(hù)只需要提供樣品 DNA 模板,,操作簡(jiǎn)單,。
2. 預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 494 bp,。
3. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷,。反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物,、酶,、dNTP,、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,,只要知道任何一段模板DNA序列,, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增,。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,,常用為20bp左右,。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),,特別是3'端的互補(bǔ),,否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶,。
⑤引物3'端的堿基,,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗,。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn),, 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處,。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性,。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
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Q-PCR技術(shù):
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR)/QRT-PCR,,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記物,,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)擴(kuò)增曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。熒光定量PCR不僅實(shí)現(xiàn)真正實(shí)現(xiàn)了定量,,而且具有靈敏度和特異性、高能實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng),、自動(dòng)化程度高,、無(wú)污染、實(shí)時(shí)和準(zhǔn)確等特點(diǎn),。
熒光定量PCR所使用的熒光基團(tuán)可分為兩種:熒光探針和熒光染料,。
1.使用SYBR熒光染料法來(lái)進(jìn)行熒光定量PCR時(shí),我們首先在PCR反應(yīng)體系中加入過(guò)量SYBR熒光染料,。SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后發(fā)射一定量的熒光信號(hào),,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
2.Taqman探針則是利用探針與模板的特異性結(jié)合的特點(diǎn),,以及探針內(nèi)熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的分子特性來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)PCR進(jìn)行定量檢測(cè)。這種方法可以實(shí)現(xiàn)高靈敏度,,嚴(yán)格針對(duì)特定堿基序列的定量實(shí)驗(yàn),。