GelRed and Gelgreen 核酸凝膠染料

zui靈敏 , zui穩(wěn)定的核酸凝膠染色試劑,，是真正的EB替代產(chǎn)品,！

部分產(chǎn)品報(bào)價(jià)

由美國(guó)BIOTIUM公司技術(shù)專家研發(fā)的GelRed 和GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑,。其水溶染色劑通過(guò)美國(guó)環(huán)保局安全認(rèn)定,，廢棄物可直接倒入下水道，而不會(huì)造成任何環(huán)境污染,。(下載美國(guó)Litron Laboratories, Inc. 完整安全檢測(cè)報(bào)告）

目前大多數(shù)商業(yè)化的核酸染料（凝膠染色試劑）總是在安全性,、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不*令人滿意。例如,，雖然 EB (溴化乙啶）作為目前使用zui廣泛的核酸凝膠染色試劑,，能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度，但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì),。而且EB染色后具有較高的背景熒光信號(hào)（如圖1）,。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為zui靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解,，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠,。 SYBR safe 被認(rèn)為是市場(chǎng)上較為安全的核酸染料 ，但它的染色效果還遠(yuǎn)不及 SYBR Green I ,。

至于國(guó)內(nèi)有公司宣稱的新產(chǎn)品Goldview,，我們不想多加評(píng)論。因?yàn)閺臉O為相似的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,，該產(chǎn)品似乎就是AO（丫啶橙 ,，一種劇毒產(chǎn)品，且熒光亮度不佳）,。請(qǐng)看Goldview 與 AO 對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果（其中Goldview是從國(guó)內(nèi)某公司采購(gòu),，AO則來(lái)自SIGMA，報(bào)告來(lái)自開(kāi)放生物）

特性:

 高靈敏度 
GelRed 和 GelGreen 是目前市場(chǎng)中zui靈敏的凝膠核酸染料
 穩(wěn)定性* 
可以使用微波爐加熱,，可以在室溫下保存
 更安全  
艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明,，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于 溴化乙錠 （ EB ） 
 廣泛的適應(yīng)性  
適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色 
 染色過(guò)程簡(jiǎn)單  
與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過(guò)程中不必?fù)?dān)心染料降解,；而電泳后染色過(guò)程也只需 30 分鐘且無(wú)需脫色或沖洗   
 對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響極小  
對(duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I 
 與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見(jiàn)光激發(fā)的凝膠觀察裝置*兼容  
使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時(shí),， GelRed 可以*的替代 EB ；使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見(jiàn)光激發(fā)的凝膠觀察裝置時(shí),， GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料（見(jiàn)圖 4 中的光譜圖）

Biotium公司的GelRed 和 GelGreen 無(wú)論用于預(yù)制凝膠染色還是凝膠電泳后染色,，都表現(xiàn)出了*的靈敏度,。為配合 312 nm UV 凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計(jì)的 GelRed ，在使用了我們新開(kāi)發(fā)的具有的試驗(yàn)步驟后（該試驗(yàn)步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統(tǒng)的 TBE 緩沖溶液）,，在凝膠電泳后染色中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于 SYBR Gold ,。但與 SYBR Gold 不同， GelRed 在預(yù)制凝膠中使用時(shí)仍然有*的靈敏度,，事實(shí)上GelRed 在檢測(cè)低濃度,、微量 DNA 方面比 EB 表現(xiàn)出更高的靈敏度，尤其對(duì)小分子量的 DNA 檢測(cè)非常靈敏（圖1）,。 GelGreen 可以滿足使用 488 nm 激光凝膠掃描儀或者可見(jiàn)光激發(fā)的 Dark Reader 的研究人員的使用要求,。 GelGreen 無(wú)論是在預(yù)制凝膠還是凝膠電泳后染色中都與 SYBR Green I 靈敏度相當(dāng)，但不存在后者的不穩(wěn)定性問(wèn)題,。實(shí)際上,， GelRed 和 GelGreen ，特別是 GelRed 非常穩(wěn)定,，可以長(zhǎng)期在室溫下保存,。當(dāng)這兩種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩沖溶液中時(shí)甚至可以使用微波爐加熱，便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠,。含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備,，長(zhǎng)期保存。

同樣重要的是,， GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性,。 獨(dú)立的測(cè)試服務(wù)公司（ Litron Laboratories, Inc. ）進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測(cè)試結(jié)果表明， 在 18.5 μ g /mL （該濃度遠(yuǎn)高于推薦用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 ）濃度下,， GelGreen 沒(méi)有誘變性,，而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時(shí)有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,，正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性,。如圖3,。相反,， SYBR Green I 廣泛地用于活細(xì)胞線粒體和核 DNA 染色，這正是由于它能快速的被細(xì)胞吞入,。由于已知 SYBR Green I 對(duì)紫外線導(dǎo)致的突變有強(qiáng)烈的增強(qiáng)作用（ Ohta et al. Mutat. Res.  492 , 91(2001) ）,，因此它的高細(xì)胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀察時(shí)成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。
 

GelRed使用方法：

1：膠染法（用法同EB）

1）制膠時(shí)加入GelRed核酸染料（例如：每50mL瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000 × 儲(chǔ)液,，以此比例類推）,。

2）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。

注意事項(xiàng)：此方法染色染料用量相對(duì)較少,。500 μL染料大約可以做100塊50mL的膠,。由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性,，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻,。搖晃,，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠,。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備,，并長(zhǎng)期保存直到使用,。

此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法,。

2．泡染法

1）按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳,。

2）用H2O將GelRed 10,000× 儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液,。（例如將15μL GelRed 10,000× 儲(chǔ)液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）,。

3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中,。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒(méi)凝膠,。室溫振蕩染色30min左右，染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同,。對(duì)于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠,，染色時(shí)間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長(zhǎng),。

注意事項(xiàng)：用泡染法染色時(shí),，染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右,。3× GelRed染色液可以大量制備,，在室溫下避光保存直至用完。

如果總是看到條帶彌散或分離不理想,，建議使用泡染法染色以確認(rèn)問(wèn)題是否與染料有關(guān),。如果染色后問(wèn)題依舊存在，則說(shuō)明問(wèn)題與染料無(wú)關(guān),，請(qǐng)嘗試：降低瓊脂糖濃度,；選用更長(zhǎng)的凝膠；延長(zhǎng)凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰,；改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色,。

特別提醒：如果您使用的是紫外成像儀，請(qǐng)選擇GelRed,；如果您使用激光成像儀或希望在可見(jiàn)光下

觀測(cè),，請(qǐng)選擇GelGreen在極少數(shù)情況下,，質(zhì)粒經(jīng)某些酶切后的DNA樣品會(huì)出現(xiàn)拖尾和分辨率降低，

此時(shí)建議同時(shí)嘗試兩種染色方法以決定哪種方法更加合適,。

鄭重聲明：

凡是市場(chǎng)上聲稱具有與Gelred和Gelgreen相同特性的 EB 替代品，且不指明是 Biotium 公司品牌的核酸染料,，經(jīng)檢驗(yàn)都是通過(guò)Gelred或 Gelgreen稀釋后重新包裝的水貨,，染色質(zhì)量遠(yuǎn)不及Biotium原包裝產(chǎn)品。我們鄙視這種損害客戶利益的行為,，并堅(jiān)決打擊,，發(fā)現(xiàn)一次我們將不再向其供貨！ 在此,，我們呼吁用戶在購(gòu)買(mǎi)Biotium公司產(chǎn)品時(shí),， 請(qǐng)選擇開(kāi)放生物--Biotium中國(guó)總代理（OPE）或者上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司購(gòu)買(mǎi) 。

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