Vydac反相分析柱 純化多肽柱 蛋白柱用于反相分析與純化多肽及蛋白分子的經(jīng)典產(chǎn)品 

反相分析柱 純化多肽柱 蛋白柱反相分析及制備生物分子的Vydac經(jīng)典反相色譜產(chǎn)品快速索引表

可向我們索取英文版和中文版的《反相HPLC 分析和純化多肽和蛋白手冊》,，有大量實用性*的技術(shù)信息供科研和技術(shù)工作人員參考。

色譜柱的清潔與再生 

VYDAC®蛋白質(zhì)/肽反相色譜柱可能會因為被吸附能力強(qiáng)的樣品成分污染而導(dǎo)致柱性能下降,。如

果前面所給的建議方法不能解決問題,，那么試試如下方法： 

1. 注射1％SDS溶液zui多達(dá)該色譜柱體積的12％（對于4.6mm×250mm規(guī)格色譜柱約為500µL）。然后用含有0.1％（v/v）TFA的5％到95％的乙腈進(jìn)行20分鐘的梯度洗脫,。 

2. 如果是脂類物質(zhì)或疏水性*的小分子物質(zhì)導(dǎo)致了柱性能的變化,，我們建議您用數(shù)倍于柱

體積的溶劑按如下順序沖洗該色譜柱：乙腈（10個柱體積），二氯甲烷（10個柱體積）,，正己烷（10

個柱體積）,，二氯甲烷（10個柱體積），乙腈（10個柱體積）

 3. 如果色譜柱性能的損失源于蛋白質(zhì)吸附,，對于任何聚合式鍵合相我們建議可使用0.1N硝酸/異丙醇

（1：4）的混合液來沖洗該色譜柱,。低流速（普通流速的20％）的隔夜沖洗是zui有效的。

注意：硝酸清洗  不建議用于238TP, 238MS和238EV的“單點(diǎn)式,、單點(diǎn)式””鍵合鍵合反相色譜,、反相色譜柱。

 4. 使用6M的鹽酸胍水溶液,。先過濾胍溶液,，然后與異丙醇1:1混合。注射5％柱體積（對于一個4.6×250mm的分析柱,，注射200µL）,，然后運(yùn)行異丙醇:水 1:1沖洗該柱。這樣能夠得到一個胍溶液組成的“塞流”,，能夠打碎松脫柱內(nèi)牢固附著的蛋白質(zhì)物污染物,。

 5. 合成肽：從固相樹脂上裂解下合成肽會產(chǎn)生具有高反應(yīng)活性的碳正離子而需要用苯甲醚和

茴香硫醚來“打掃”清除。而這些清除正碳離子的反應(yīng)產(chǎn)生大量的,、可溶于有機(jī)溶劑的

芳香性化合物分子出現(xiàn)在“打掃”溶液中,。用100％乙腈或者100％甲醇清洗色譜柱可能

無法將這些分子清洗干凈。又或者,，有時，用這些有機(jī)溶劑清洗色譜柱可以除去一些這樣

的污染物,，但是會產(chǎn)生蠟狀沉淀物,，有時會被誤認(rèn)為柱內(nèi)的C18鍵合相流失。要進(jìn)行清除：用異丙醇

0-100%進(jìn)行梯度清洗大于10倍柱體積，在100％異丙醇處持續(xù)沖洗或直至基線平衡,。在260nm

下檢測,。用100％二氯甲烷沖洗至基線平衡。在使用前用異丙醇除去

二氯甲烷,。這個方法在用于除去化學(xué)合成所引入的污染物方面*,。

反相色譜分離肽或蛋白時，應(yīng)參考被分析或被純化目標(biāo)的疏水性大小及分子量大小來選擇合適的鍵和相,。