40509ES Collagenase III 膠原酶III型
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) 40509ES
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/4/27 13:20:28
- 訪問次數(shù) 878
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | 40509ES |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
Collagenase III 膠原酶III型
產(chǎn)品描述
膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,,一種肽鏈內(nèi)切酶,,能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中,很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘|氨酸(Gly)之間的肽鍵,。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,,但膠原酶是*一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi),。
本品來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),,是一種酶粗提物,,不僅含有膠原酶(更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維,。還含有其他的一些蛋白酶,、多糖酶、脂酶等,,分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白,,多糖和脂質(zhì),使得本品非常適用于組織消化,。
目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異,,分為4種類型:膠原酶I型、II型,、III型和IV型,,在應(yīng)用上有所偏向:1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶,酪蛋白酶,,梭菌蛋白酶,,胰|蛋白酶|活性)。通常用作上皮細(xì)胞,、肝,、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備,;2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,,通常用于心臟、骨,、肌肉,、肝、甲狀腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備,;3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,,常用于乳腺細(xì)胞的制備;4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低胰|酶活性,,通常用于胰島細(xì)胞的制備,,或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。
本品為III型膠原酶,,≥100 U/mg solid,,常用于乳腺細(xì)胞和胎兒細(xì)胞的制備。
產(chǎn)品性質(zhì)
分子量(Molecular Weight) | 68-130 kDa |
激活劑(Activators) | Ca2+,、Zn2+ |
抑制劑(Inhibitors) | EDTA, EGTA,Cysteine, histidine, 2-mercaptoethanol, o-phenanthroline DTT, Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+, Not inhibited by DFP or serum |
活力單位(Unit definition) | 在37℃,,pH7.5 的條件下,5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1μM L-亮|氨酸的酶量定義為1個(gè)酶活力單位,。 |
運(yùn)輸和保存方法
室溫運(yùn)輸,。4℃避光保存,2年有效,。儲(chǔ)存液-20℃避光凍存,。
注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。
使用方法
1. 膠原酶儲(chǔ)存液的配制
向每管100mg的膠原酶中加入100μL的含Ca2+,、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡|鹽溶液,含Ca2+,、Mg2+),,輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,制備成1g/ml(即1000×)的儲(chǔ)存液,。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌,,分裝成小份量,然后于-20℃避光凍存,。
使用前于冰上解凍,,避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為:0.5-2.5mg/ml,,用于軟骨消化的常用濃度為1-2mg/ml,,需要根據(jù)特定的實(shí)驗(yàn)條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的*工作濃度。
2.組織的分離
1)使用無菌手術(shù)|刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊,;
2)利用含Ca2+,、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次;
3)加入足量的含Ca2+,、Mg2+的HBSS,,使其浸沒組織塊,并加入膠原酶至需要工作濃度,;
4)于37℃孵育4-18h,。消化時(shí)使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補(bǔ)充消化可以提高消化效率。
5) 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,,收集備用,。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育;
6)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次,;
7)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞,,利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。
8)于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞,。
3. 器官灌注
1)向37℃預(yù)熱的含Ca2+,、Mg2+的HBSS中加入膠原酶,另添加3mM的CaCl2有助于提高分離效率,;
2)按照已優(yōu)化的速率對(duì)相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液,;
3)將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩,,從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來,未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進(jìn)一步孵育,;
4)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次,;
5)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞,利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度,。
6)于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞,。
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | |
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40508ES60 | Collagenase II 膠原酶II型 | 100mg | |
40509ES60 | Collagenase III 膠原酶III型 | 100mg | |
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40511ES60 | Collagenase V膠原酶V型 | 100mg |
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