一、參數(shù)規(guī)格

人核糖核酸酶(RNASE)ELISA試劑盒樣品收集,、處理

1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

二,、標本要求

1. 血清：：溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。

2. 血漿：根據(jù)標本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。

3. 尿液：無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實行,。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清,。

5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?/span>2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),，或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化,。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。

三、使用方法

人核糖核酸酶(RNASE)ELISA試劑盒測定法的靈敏度來自作為報告的酶,。*,，酶是一種有機催化劑,，很少量的酶即可誘導大量的催化反應，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應現(xiàn)象,。因此該體系常被稱為酶放大體系,。

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

   12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

   6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

   3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

   1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

四,、注意事項

    1. 由于底物顯色劑對光及其敏感,，因此要避光保存。

2. 檢測吸光度前應將酶標儀打開,，將其預熱30min以上,。

3. 孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準,。

4. 要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準確性,，又能反映出試劑盒的精密度,。

5. 對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。

五,、代測服務

1. 客戶以快遞形式送標本,，上海市內(nèi)客戶代測樣本可享我司上門取樣服務。

2. 客戶的標本嚴格遵循標本的前處理原則,。

3. 本公司人核糖核酸酶(RNASE)ELISA試劑盒代測服務提供真實的機讀OD值結果和照片,。