超濾離心管|
- 公司名稱 北京索萊寶科技有限公司
- 品牌 SOLARBIO/索萊寶
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 其他
- 更新時間 2017/5/28 5:17:29
- 訪問次數(shù) 966
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超濾離心管 0.5ml
超濾離心管 4ml
超濾離心管 15ml
說明:超濾離心管常用于做細胞培養(yǎng)上清的蛋白濃縮的實驗。
注意事項:
使用注意事項
(1)選擇合適的超濾離心管,。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管,。若目的蛋白分子量為10kD左右,,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,,注意超濾膜對各種化學物質(zhì)的耐受程度有所不同,。
(2)新買來的超濾離心管是干燥的,,使用前加入超純水,水量*過膜,,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘,。然后將水倒出,即可加入蛋白液,,加入的多少,,以不超過管頂?shù)陌拙€為準。操作要輕,,加入蛋白液前,,超濾管需要插在冰上預冷。
(3)平衡,。質(zhì)量和重心二者都要達到平衡,。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜,。開始離心超濾(離心機預冷至4度),。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后,有所不同,。離心機的加速度調(diào)至低檔,,減小對膜的壓力。注意,,一定要等離心機達到目的轉速之后,,方可離開離心機,否則離心機出問題時,,無法*時間處理。膜與轉軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直),。在實際使用中,,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命,。
(4)當濃縮到剩下1ml時,,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,,看有沒變藍色,,以此判斷超濾離心管是否漏掉蛋白。如果管漏了,,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾,。要判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,,再取流穿,,跑蛋白膠或Bradford粗測,,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),,直到所有濃縮液都加完為止,。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導致堵管,。若發(fā)生沉淀,,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適,;前者可用多根超濾管同時超濾,,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止,。
(5)前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,,輕輕加入新的Buffer(經(jīng)0.22um超濾膜超濾),再 濃縮至1ml左右,,連續(xù)三次,,后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,,也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況,。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,,基本上可以達到換buffer的目的,。
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