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兔干擾素w（IFN-w）ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法，雙抗體夾心原理,，是基于要測試的抗原具有二價(jià)以上的特性,，能識別包被抗體，同時(shí)能識別檢測抗體,，具體過程如下：
（1）將特異性抗體與固相載體連接,，形成固相抗體，洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì),，并用無關(guān)蛋白封閉空余結(jié)合位點(diǎn),。
（2）加受檢標(biāo)本使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合,，形成固相抗原復(fù)合物,。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
（3）加生物素標(biāo)記抗體,，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與生物素標(biāo)記抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗體,。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān),。
（4）加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素，使生物素標(biāo)記抗體與辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素結(jié)合,。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)記物,。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
（5）加入底物顯色,，即可計(jì)算標(biāo)本濃度,。
（6）注：一個(gè)抗體分子上可以標(biāo)記上若干個(gè)生物素分子，一個(gè)生物素分子可以結(jié)合一個(gè)辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，從而帶來了大量的辣根過氧化物酶結(jié)合到抗體上,，比傳統(tǒng)的直接辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體具有更高的敏感性和放大效應(yīng),。

兔干擾素w（IFN-w）ELISA試劑盒標(biāo)本收集注意事項(xiàng)

1. 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管,。
2. 血清和血漿避免使用溶血,，高血脂標(biāo)本。
3. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明,，懸浮物應(yīng)離心去除,。
4. 標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測，需按一次使用量分裝,，凍存于-20℃,，-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融,。
5. 可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況,，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)） ,。
6. 收集標(biāo)本,，盡量做到雙份的用量，避免一次實(shí)驗(yàn)失敗,，重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本缺失,，從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
7. 收集標(biāo)本時(shí),，應(yīng)該做好防護(hù)措施（比如戴手套,，口罩，護(hù)目鏡等）,，認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險(xiǎn)性,。
8. 樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜,。

標(biāo)本處理辦法
1. 血清：將采集的全血靜置冰箱4℃,，然后1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試,，暫時(shí)不測可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃（3-6個(gè)月）保存,。
2. 血漿：用EDTA，枸櫞酸鈉,，肝素等作為抗凝劑,，加入血液混勻后，1000-3000rpm離
心10分鐘,，取上清立即測試,，暫時(shí)不測可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃（3-6個(gè)月）
保存,。
3. 組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過洗一次,；按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,，在冰水中勻漿。勻漿完成后,，5000-10000rpm離心10分鐘,，取上清立即測試，暫時(shí)不測可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃（3-6個(gè)月）保存,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000-3000rpm離心10分鐘,，取上清立即測試，暫時(shí)不測可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃（3-6個(gè)月）保存,。
5. 尿液,，腹水，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘,，取上清立即測試,，暫時(shí)不測可以放入-20℃（1-3個(gè)月）或-80℃3-6個(gè)月）保存。

操作程序總結(jié)

準(zhǔn)備試劑,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,，37℃反應(yīng)90分鐘

洗板2次，加入生物素化抗體工作液,，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板3次,，加入ABC工作液，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次,，加入TMB顯色液,，37℃反應(yīng)

加入TMB終止液

10分鐘之內(nèi)酶標(biāo)儀測OD值

計(jì)算標(biāo)本待測因子含量

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