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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>生命科學(xué)儀器>動(dòng)物實(shí)驗(yàn)儀器>動(dòng)物代謝檢測系統(tǒng)> 人抗甲狀腺球蛋白抗體原裝ATGA/TGAB檢測Elisa試劑盒


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,,采血操作方法

1.采血法 各種動(dòng)物采血方法不一,。馬、牛,、羊等大動(dòng)物一般從頸靜脈采血,,豬從頸靜脈、前腔靜脈或耳靜脈采血,,家禽由翼下靜脈或心臟采血,,兔由心臟或耳靜脈采血,犬由頸靜脈或四肢靜脈采血,,豚鼠由心臟采血,,小白鼠則可斷尾或剪斷腋下血管或剪斷眼球采血。

2.抗凝 采集血液zui關(guān)鍵的問題是抗凝,,采用什么方法進(jìn)行抗凝,,則根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求和條件而定。zui常用的方法如下:

1)肝素抗凝:采血時(shí),,使每ml血液含15U~20U肝素即可,。計(jì)算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,,直接放入采血容器中,,采血時(shí),邊采血邊輕輕搖動(dòng),,使抗凝劑和血液混勻,。對于采少量的血液或小動(dòng)物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,,再采血直接抗凝,。

2EDTA抗凝:采血前,用滅菌生理鹽水將EDTA配制成4%溶液,,然后按預(yù)采血液的量,,以每ml血液加入1mg~2mgEDTA的液體量于采血容器內(nèi),。采血,并不斷搖動(dòng)采血容器,,使之混勻,。

3)玻璃珠法:預(yù)先將適量的玻璃珠(根據(jù)采血量多少而定)清洗后,裝入采血容器中,,滅菌后備用,。采血過程中,邊采邊搖采血瓶,,以使小玻璃珠在血液中滾動(dòng),,以機(jī)械地除去纖維蛋白,使血液不能凝固,。本法雖較麻煩,,但對淋巴細(xì)胞的活性影響zui小,且可減少血小板的混雜,。

4)阿氏液采血:以阿氏液和采血量以11比例采集血液,,邊采邊輕輕搖動(dòng)采血瓶,使之混勻,。用阿氏液采血,,除了抗凝外,多用于紅細(xì)胞的保存,。一般在4條件下,,阿氏液中保存的紅細(xì)胞2周其活性和特性不變。

1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為110μg/ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,,4 過夜。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,,下同)。
2.
 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,,置
37 孵育1小時(shí)。然后洗滌,。(同時(shí)做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3.
 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。
37 孵育0.51小時(shí),,洗滌。
4.
 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,,
37 1030分鐘,。
5.
 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入
2M硫酸0.05ml
6.
 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”“-”號(hào)表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。

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