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維生素D（vitamin D）為固醇類衍生物,，具抗佝僂病作用,，又稱抗佝僂病維生素。維生素D家族成員中zui重要的成員是D2和D3,。雖然日常膳食可補(bǔ)充部分維生素D,，但仍有相當(dāng)一部分人面臨著維生素D攝入不足的問題，各種人為添加維生素D的食品便應(yīng)運(yùn)而生,。因此，準(zhǔn)確測定各種食品中的維生素D含量顯得非常重要,，科研工作者也一直在努力尋找合適的測定方法來得到準(zhǔn)確,、重現(xiàn)性好的結(jié)果。
迪馬科技應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室采用ProElut VDC維生素D2,、D3固相萃取柱進(jìn)行前處理凈化,，Diamonsil C18(2)液相色譜柱成功實(shí)現(xiàn)米粉中維生素D2、D3的分離,、測定,，具有分析結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好的特點(diǎn),。
維生素D2,、D3檢測萃取柱樣品準(zhǔn)備
(1) 取1 g樣品，加入10 mL水,，充分混勻,；
(2) 加入1 mL二甲基亞砜、5 mL甲醇和20 mL 正己烷：甲基叔丁基醚=1：2,，渦旋混合2 min,，6000 rpm離心2 min，收集上清液,；
(3) 向下層殘?jiān)幸来渭尤?/span>1 mL二甲基亞砜,、5 mL甲醇和10 mL 正己烷：甲基叔丁基醚=1：2，重復(fù)提取兩次,，合并三次提取上清液,；
(4) 將上清液在40 ℃下減壓蒸至近干，待凈化,。
SPE柱凈化——ProElut VDC 2 g/12 mL (Cat.#：65358)
(1)活 化： | 依次向柱中加入10 mL乙酸乙酯,、10 mL正己烷，棄去流出液,； |
(2)上 樣： | 再用5 mL正己烷分兩次洗滌旋蒸瓶并加入柱中,，棄去流出液； |
(3)淋 洗： | 依次向柱中加入10 mL正己烷、10 mL10%乙酸乙酯正己烷,，棄去流出液,； |
(4)洗 脫： | 向柱中加入20 mL 10%乙酸乙酯正己烷，收集流出液,； |
(5)重新溶解： | 將洗脫液在40 ℃減壓蒸至近干,，用甲醇定容至1 mL，供HPLC分析,。 |
分析條件
色譜柱： | Diamonsil C18(2),，250 mm × 4.6 mm，5 μm（Cat# 99603） |
流 速： | 1.0 mL/min |
檢測器： | UV 264 nm |
柱 溫： | 30 ℃ |
進(jìn)樣量： | 20 μL |
流動相： | 甲醇 |
添加回收結(jié)果
米粉中維生素D2,、D3（添加水平2.0 mg/kg）的添加回收結(jié)果
目標(biāo)化合物 | 維生素D2 | 維生素D3 |
回收率(%) | 84.69 | 87.42 |
維生素D2,、D3 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖(2.0 mg/L)
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米粉中維生素D2、D3(添加水平2.0 mg/kg)色譜圖
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米粉中維生素D2,、D3(空白)色譜圖
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米粉中維生素D2,、D3的檢測相關(guān)產(chǎn)品信息：
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
樣品前處理 | ||
65358 | 維生素D2、D3檢測柱 ProElut VDC | 2 g/12 mL,20/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵,，無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
37177 | 針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
37180 | 針頭式過濾器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
色譜柱及保護(hù)柱 | ||
99603 | 通用型反相液相色譜柱 Diamonsil C18（2） | 250 × 4.6 mm, 5 μm |
6201 | EasyGuard保護(hù)柱套裝 | 1個(gè)柱套+2個(gè)柱芯 10 × 4.0 mm |
標(biāo)準(zhǔn)品 | ||
12-N-V17-100MG | 維生素D2[50-14-6] | 100 mg |
12- N-11463-100MG | 維生素D3[67-97-0] | 100 mg |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
50104 | 乙酸乙酯 HPLC級 | 4 L |
50115 | 正己烷 HPLC級 | 4 L |
50119 | 二甲基亞砜 HPLC級 | 4 L |
50123 | 甲基叔丁基醚 HPLC級 | 4 L |
通用色譜產(chǎn)品 | ||
52401B | 瓶架/藍(lán)色 | 50 孔 |
52401A | 瓶架/白色 | 50孔 |
5323 | 樣品瓶（棕色/螺紋） | 2 mL, 100/pk |
5325 | 樣品瓶蓋/含墊（已經(jīng)組裝） | 100/pk |
H80465 | HPLC 進(jìn)樣針 | 25 μL |
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