實時熒光定量PCR技術（Real Time Quantitative PCR）

熒光定量PCR技術服務介紹：

實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,，而且與常規(guī)PCR相比,，它具有特異性更強,、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,，目前已得到廣泛應用,。
   實時熒光定量PCR：在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。

 定量（Absolute Quantification，AQ）分析用于確定未知樣本中某個核酸序列的量值,，即通常所說的拷貝數(shù),，應用與病原體檢測，轉(zhuǎn)基因食品檢測,，及基因表達研究。

非特異性熒光標記：SYBR Green

SYBR Green特性：（1）.只有和雙鏈DNA結合后才發(fā)熒光,。（2）.變性時,，DNA雙鏈分開，無熒光,。（3）.在延伸結束階段采集熒光信號,。（4）.SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結合發(fā)光，所以必須在反應結束時做熔解曲線分析,。

特異性熒光標記：

TaqMan探針的特性：（1）.5′端標記有報告基團（Reporter, R）,，如FAM、VIC等 （2）.3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）（3）.探針完整,，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,，無熒光， R與Q分開,，發(fā)熒光（4）.Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,，可水解探針

定量的標準樣品：

（1）.含有和待測樣品相同擴增片段的克隆質(zhì)粒（2）.含有和待測樣品相同擴增片段的cDNA（3）.PCR的產(chǎn)物，可分別做系列稀釋,。

服務流程：

注意：客戶可根據(jù)所能提供的起始材料不同，選擇從步驟1或2啟動項目,。

我司分子生物學技術服務項目包括：
       熒光定量PCR,，反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測；PCR產(chǎn)物克隆,，TA克隆,，亞克隆,；RNAi干擾檢測,；miRNA檢測；質(zhì)粒載體構建等