實(shí)時熒光定量PCR（Real Time Quantitative PCR）

熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)介紹：

實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng),、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn),，目前已得到廣泛應(yīng)用,。
     實(shí)時熒光定量PCR：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
     定量PCR儀是在普通PCR儀的基礎(chǔ)上加裝了熒光激發(fā)裝置和熒光檢測裝置，PCR擴(kuò)增和檢測同時進(jìn)行,，zui終結(jié)果不需進(jìn)行電泳檢測,，所以有效地避免了樣品間的交叉污染。

相對定量用于測定一個測試樣本中目標(biāo)核酸序列與校正樣本中同一序列表達(dá)的相對變化,。校正樣本可以是一個未經(jīng)處理的對照或者是在一個時辰研究中處于零時的樣本,。

相對定量應(yīng)用（Relative Quantification,，RQ）

非特異性熒光標(biāo)記：SYBR Green

SYBR Green特性：

只有和雙鏈DNA結(jié)合后才發(fā)熒光,。變性時,，DNA雙鏈分開，無熒光,。在延伸結(jié)束階段采集熒光信號,。SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)光，所以必須在反應(yīng)結(jié)束時做熔解曲線分析,。

相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin,、GAPDH基因等看家基因
在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小
內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量

相對定量分析方法1    2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
 1,、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
   ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
   ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
 2,、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值：
        ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
 3、計(jì)算表達(dá)水平比率：
                   2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

服務(wù)流程：

注意：客戶可根據(jù)所能提供的起始材料不同，選擇從步驟1或2啟動項(xiàng)目,。

我司分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目包括：
       熒光定量PCR,，反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測；PCR產(chǎn)物克隆,，TA克隆,，亞克隆,；RNAi干擾檢測,；miRNA檢測；質(zhì)粒載體構(gòu)建等