DH5 aλpir感受態(tài)細胞*

產(chǎn)品貨名：DH5αλpir Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號：G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)
規(guī)格/簡介：G6018-10(10支100ul),、G6018-100(100支100ul)

基因型

F- φ80 lac Z△M15△(lacZYA- -arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk- ,， mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

簡要說明|

CLBio DH5a入pir 菌株來源于DH5a，在DH5a大腸桿菌基因組中引入LAMpir,，即為DH5a入pir,，該菌株可以表達PIR蛋白，使得含有R6Kg ori 復制子的質(zhì)?？梢栽谄渲姓椭?。DH5a入pir 菌株缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率,，保證了插入DNA的穩(wěn)定性; lacZOM15 的存在使DH5a可用于藍,、白斑篩選;但DH5a入pir 菌株生長速度較慢，在平板培養(yǎng)或液體搖菌時應延長生長時間,。CLBio DH5a λpir感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,，pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率>1X109 cfu/ μg DNA。

操作說明：

1. DH5a λpir 感受態(tài)細胞從-80°C拿出,，迅速插入冰中,，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手打EP管底混勻,，冰中靜置25分鐘。

2.42*C水浴熱激45秒,，迅速放回冰.上并靜置2分鐘,，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μ1不含抗生素的無菌LB培養(yǎng)基,，混勻后37°C,，200 rpm復蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懇菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上,。

5.將平板倒置放于37°C培養(yǎng)箱至少18小時。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞建議在冰中緩慢融化,。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,，長時間存放會降低轉化效率。

2.DH5aλpir菌株生長緩慢,，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時應延長菌體生長時間(37°C,， 18 小時以上)。

3.轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量,。

DH5 aλpir感受態(tài)細胞*