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5月色譜儀市場需求仍舊持續(xù)上漲中,，中標(biāo)總金額[詳細(xì)]
藥品質(zhì)量檢測方法之高效液相色譜法
2022年08月29日 11:20:30
來源：化工儀器網(wǎng) 作者：吳吳吳 點(diǎn)擊量：8606
近期，化工儀器網(wǎng)編輯整理了一系列藥品質(zhì)量檢測方法,，本文將從儀器要求,、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、測定方法以及多維液相色譜四個(gè)方面為大家介紹藥品質(zhì)量檢測方法之高效液相色譜法,。
【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】藥品是一種特殊的商品,，它可以用于人疾病的預(yù)防、治療以及診斷,，藥品的質(zhì)量關(guān)系著人民群眾的生命健康,。藥品質(zhì)量檢測是指借助一定檢測手段，對藥物進(jìn)行鑒別,、含量測定以及進(jìn)行有效性,、均一性、純度要求與安全檢查，并將結(jié)果與規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較,，最終判斷被測藥物是否符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的一種質(zhì)量控制活動,。
根據(jù)2020版《中華人民共和國藥典》，藥品檢測方法主要包括儀器分析方法,、物理常數(shù)測定方法,、生物檢查法、分子生物學(xué)檢查法,、其他測定方法等,。近期，化工儀器網(wǎng)編輯整理了一系列藥品質(zhì)量檢測方法,，本文將從儀器要求,、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、測定方法以及多維液相色譜四個(gè)方面為大家介紹藥品質(zhì)量檢測方法之高效液相色譜法,。
高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱,，對供試品進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入的供試品,，由流動相帶入色譜柱內(nèi),，各組分在柱內(nèi)被分離，并進(jìn)入檢測器檢測,，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號,。
一、對儀器的一般要求和色譜條件
高效液相色譜儀由高壓輸液泵,、進(jìn)樣器,、色譜柱、檢測器,、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成,。色譜柱內(nèi)徑一般為 2.1~4.6mm，填充劑粒徑約為 2~10μm,。超高效液相色譜儀是耐超高壓,、小進(jìn)樣量、低死體積,、高靈敏度檢測的高效液相色譜儀,。
1、色譜柱
?、俜聪嗌V柱：以鍵合非極性基團(tuán)的載體為填充劑填充而成的色譜柱,。常見的載體有硅膠、聚合物復(fù)合硅膠和聚合物等,；常用的填充劑有十八烷基硅烷鍵合硅膠,、辛基硅烷鍵合硅膠和苯基硅烷鍵合硅膠等。
②正相色譜柱：用硅膠填充劑,，或鍵合極性基團(tuán)的硅膠填充而成的色譜柱,。常見的填充劑有硅膠,、氨基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠等,。氨基鍵合硅膠和氰基鍵合硅膠也可用作反相色譜。
?、垭x子交換色譜柱：用離子交換填充劑填充而成的色譜柱,。有陽離子交換色譜柱和陰離子交換色譜柱。
?、苁中苑蛛x色譜柱：用手性填充劑填充而成的色譜柱,。
色譜柱的內(nèi)徑與長度，填充劑的形狀,、粒徑與粒徑分布,、孔徑、表面積,、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度,、載體表面基團(tuán)殘留量，填充的致密與均勻程度等均影響色譜柱的性能,，應(yīng)根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)來選擇合適的色譜柱,。
溫度會影響分離效果，品種正文中未指明色譜柱溫度時(shí)系指室溫,，應(yīng)注意室溫變化的影響,。為改善分離效果可適當(dāng)調(diào)整色譜柱的溫度。
殘余硅羥基未封閉的硅膠色譜柱,，流動相pH值一般應(yīng)在2-8之間,。烷基硅烷帶有立體側(cè)鏈保護(hù)、或殘余硅羥基已封閉的硅膠,、聚合物復(fù)合硅膠或聚合物色譜柱可耐受更廣泛pH值的流動相,，可用于 pH 值小于 2 或大于 8 的流動相。
2,、檢測器
最常用的檢測器為紫外-可見分光檢測器,，包括二極管陣列檢測器，其他常見的檢測器有熒光檢測器,、蒸發(fā)光散射檢測器,、電霧式檢測器、示差折光檢測器,、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器等,。
紫外-可見分光檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器為選擇性檢測器,，其響應(yīng)值不僅與被測物質(zhì)的量有關(guān),，還與其結(jié)構(gòu)有關(guān)；蒸發(fā)光散射檢測器,、電霧式檢測器和示差折光檢測器為通用檢測器,，對所有物質(zhì)均有響應(yīng)；結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)在蒸發(fā)光散射檢測器和電霧式檢測器的響應(yīng)值幾乎僅與被測物質(zhì)的量有關(guān),。
紫外-可見分光檢測器,、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器和示差折光檢測器的響應(yīng)值與被測物質(zhì)的量在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,；蒸發(fā)光散射檢測器的響應(yīng)值與被測物質(zhì)的量通常呈指數(shù)關(guān)系,，一般需經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換；電霧式檢測器的響應(yīng)值與被測物質(zhì)的量通常也呈指數(shù)關(guān)系,，一般需經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換或用二次函數(shù)計(jì)算,，但在小質(zhì)量范圍內(nèi)可基本呈線性。
不同的檢測器,，對流動相的要求不同,。紫外-可見分光檢測器所用流動相應(yīng)符合紫外-可見分光光度法(通則 0401)項(xiàng)下對溶劑的要求；釆用低波長檢測時(shí),，還應(yīng)考慮有機(jī)溶劑的截止使用波長,。蒸發(fā)光散射檢測器、電霧式檢測器和質(zhì)譜檢測器不得使用含不揮發(fā)性成分的流動相,。
3,、流動相
反相色譜系統(tǒng)的流動相常用甲醇-水系統(tǒng)或乙腈-水系統(tǒng)，用紫外末端波長檢測時(shí),，宜選用乙腈-水系統(tǒng),。流動相中如需使用緩沖溶液，應(yīng)盡可能使用低濃度緩沖鹽,。用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱時(shí),，流動相中有機(jī)溶劑一般應(yīng)不低于 5%，否則易導(dǎo)致柱效下降,、色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定,。
正相色譜系統(tǒng)的流動相常用兩種或兩種以上的有機(jī)溶劑，如二氯甲烷和正己烷等,。
流動相注入液相色譜儀的方式(又稱洗脫方式)可分為兩種：一種是等度洗脫,，另一種是梯度洗脫。用梯度洗脫分離時(shí),，梯度洗脫程序通常以表格的形式在品種項(xiàng)下規(guī)定,，其中包括運(yùn)行時(shí)間和流動相在不同時(shí)間的成分比例,。
4、色譜參數(shù)調(diào)整
品種正文項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件(參數(shù)),，除填充劑種類,、流動相組分、檢測器類型不得改變外,，其余如色譜柱內(nèi)徑與長度,、填充劑粒徑、流動相流速,、流動相組分比例,、柱溫,、進(jìn)樣量,、檢測器靈敏度等，均可適當(dāng)調(diào)整,。
若需使用小粒徑(約 2µm)填充劑和小內(nèi)徑(約 2.1mm)色譜柱或表面多孔填充劑以提高分離度或縮短分析時(shí)間,，輸液泵的性能、進(jìn)樣體積,、檢測池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配,，必要時(shí)，色譜條件(參數(shù))可適當(dāng)調(diào)整,。
可通過相關(guān)軟件計(jì)算表中流速,、進(jìn)樣體積和梯度洗脫程序的調(diào)整范圍，并根據(jù)色譜峰分離情況進(jìn)行微調(diào),。
調(diào)整后,，系統(tǒng)適用性應(yīng)符合要求，且色譜峰出峰順序不變,。若減小進(jìn)樣體積,，應(yīng)保證檢測限和峰面積的重復(fù)性；若增加進(jìn)樣體積,，應(yīng)使分離度和線性關(guān)系仍滿足要求,。應(yīng)評價(jià)色譜參數(shù)調(diào)整對分離和檢測的影響，必要時(shí)對調(diào)整色譜參數(shù)后的方法進(jìn)行確認(rèn),。若調(diào)整超出表中規(guī)定的范圍或品種項(xiàng)下規(guī)定的范圍,，被認(rèn)為是對方法的修改，需要進(jìn)行充分的方法學(xué)驗(yàn)證,。
調(diào)整梯度洗脫色譜參數(shù)時(shí)應(yīng)比調(diào)整等度洗脫色譜參數(shù)時(shí)更加謹(jǐn)慎,，因?yàn)榇苏{(diào)整可能會使某些峰位置變化，造成峰識別錯誤,，或者與其他峰重疊,。
當(dāng)對調(diào)整色譜條件后的測定結(jié)果產(chǎn)生異議時(shí),，應(yīng)以品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件的測定結(jié)果為準(zhǔn)。
在品種項(xiàng)下一般不宜指定或推薦色譜柱的品牌,，但可規(guī)定色譜柱的填充劑(固定相)種類(如鍵合相,，是否改性、封端等),、粒徑,、孔徑，色譜柱的柱長或柱內(nèi)徑,；當(dāng)耐用性試驗(yàn)證明必須使用特定品牌的色譜柱方能滿足分離要求時(shí),，可在該品種正文項(xiàng)下注明。
二,、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)通常包括理論板數(shù),、分離度、靈敏度,、拖尾因子和重復(fù)性等五個(gè)參數(shù),。
按各品種正文項(xiàng)下要求對色譜系統(tǒng)進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液在規(guī)定的色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn),，必要時(shí),，可對色譜系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以符合要求,。
1,、色譜柱的理論板數(shù)（n）：用于評價(jià)色譜柱的效能。由于不同物質(zhì)在同一色譜柱上的色譜行為不同,，采用理論板數(shù)作為衡量色譜柱效能的指標(biāo)時(shí),，應(yīng)指明測定物質(zhì)，一般為待測物質(zhì)或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的理論板數(shù),。
在規(guī)定的色譜條件下,，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖,，量出供試品主成分色譜峰或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)色譜峰的保留時(shí)間 tR 和峰寬(W)或半高峰寬(Wh/2),，按 n=16(tR/W)2 或 n=5.54(tR/Wh/2)2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。tR,、W,、Wh/2可用時(shí)間或長度計(jì)(下同)，但應(yīng)取相同單位,。
2,、分離度（R）：用于評價(jià)待測物質(zhì)與被分離物質(zhì)之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)分離效能的關(guān)鍵指標(biāo),。可以通過測定待測物質(zhì)與已知雜質(zhì)的分離度,，也可以通過測定待測物質(zhì)與某一指標(biāo)性成分(內(nèi)標(biāo)物質(zhì)或其他難分離物質(zhì))的分離度,，或?qū)⒐┰嚻坊驅(qū)φ掌酚眠m當(dāng)?shù)姆椒ń到猓ㄟ^測定待測物質(zhì)與某一降解產(chǎn)物的分離度,，對色譜系統(tǒng)分離效能進(jìn)行評價(jià)與調(diào)整,。
無論是定性鑒別還是定量測定，均要求待測物質(zhì)色譜峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)色譜峰或特定的雜質(zhì)對照色譜峰及其他色譜峰之間有較好的分離度,。除另有規(guī)定外,，待測物質(zhì)色譜峰與相鄰色譜峰之間的分離度應(yīng)不小于 1.5。分離度的計(jì)算公式為：
當(dāng)對測定結(jié)果有異議時(shí),，色譜柱的理論板數(shù)(n)和分離度(R)均以峰寬(W)的計(jì)算結(jié)果為準(zhǔn),。
3、靈敏度：用于評價(jià)色譜系統(tǒng)檢測微量物質(zhì)的能力,，通常以信噪比（S/N）來表示,。建立方法時(shí)，可通過測定一系列不同濃度的供試品或?qū)φ掌啡芤簛頊y定信噪比,。定量測定時(shí),，信噪比應(yīng)不小于 10,；定性測定時(shí),，信噪比應(yīng)不小于 3。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中可以設(shè)置靈敏度實(shí)驗(yàn)溶液來評價(jià)色譜系統(tǒng)的檢測能力,。
4,、拖尾因子（T）：用于評價(jià)色譜峰的對稱性。拖尾因子計(jì)算公式為：
以峰高作定量參數(shù)時(shí),，除另有規(guī)定外,，T 值應(yīng)在 0.95~1.05 之間。
以峰面積作定量參數(shù)時(shí),，一般的峰拖尾或前伸不會影響峰面積積分,，但嚴(yán)重拖尾會影響基線和色譜峰起止的判斷和峰面積積分的準(zhǔn)確性，此時(shí)應(yīng)在品種正文項(xiàng)下對拖尾因子作出規(guī)定,。
5,、重復(fù)性：用于評價(jià)色譜系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)響應(yīng)值的重復(fù)性能。除另有規(guī)定外,，通常取各品種項(xiàng)下的對照品溶液,，連續(xù)進(jìn)樣 5 次，其峰面積測量值(或內(nèi)標(biāo)比值或其校正因子)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 2.0%,。視進(jìn)樣溶液的濃度和/或體積,、色譜峰響應(yīng)和分析方法所能達(dá)到的精度水平等，對相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的要求可適當(dāng)放寬或收緊,，放寬或收緊的范圍以滿足品種項(xiàng)下檢測需要的精密度要求為準(zhǔn),。
三,、測定方法
1、定性分析
常用的定性方法主要有但不限于利用保留時(shí)間定性,、利用光譜相似度定性,、利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息定性幾種。
①利用保留時(shí)間定性
保留時(shí)間(retention time,，tR)定義為被分離組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)該組分最大響應(yīng)值時(shí)的時(shí)間,，也即從進(jìn)樣到出現(xiàn)某組分色譜峰的頂點(diǎn)時(shí)為止所經(jīng)歷的時(shí)間，常以分鐘(min)為時(shí)間單位,，用于反映被分離的組分在性質(zhì)上的差異,。通常以在相同的色譜條件下待測成分的保留時(shí)間與對照品的保留時(shí)間是否一致作為待測成分定性的依據(jù)。
在相同的色譜條件下,，待測成分的保留時(shí)間與對照品的保留時(shí)間應(yīng)無顯著性差異,；兩個(gè)保留時(shí)間不同的色譜峰歸屬于不同化合物，但兩個(gè)保留時(shí)間一致的色譜峰有時(shí)未必可歸屬為同一化合物,，在作未知物鑒別時(shí)應(yīng)特別注意,。
若改變流動相組成或更換色譜柱的種類，待測成分的保留時(shí)間仍與對照品的保留時(shí)間一致,，可進(jìn)一步證實(shí)待測成分與對照品為同一化合物,。
當(dāng)待測成分(保留時(shí)間 tR，1)無對照品時(shí),，可以樣品中的另一成分或在樣品中加入另一已知成分作為參比物(保留時(shí)間 tR,，2)，采用相對保留時(shí)間(RRT)作為定性(或定位)的方法,。在品種項(xiàng)下,，除另有規(guī)定外，相對保留時(shí)間通常是指待測成分保留時(shí)間相對于主成分保留時(shí)間的比值,，以未扣除死時(shí)間的非調(diào)整保留時(shí)間按下式計(jì)算,。
若需以扣除死時(shí)間的調(diào)整保留時(shí)間計(jì)算，應(yīng)在相應(yīng)的品種項(xiàng)下予以注明,。
②利用光譜相似度定性
化合物的全波長掃描紫外-可見光區(qū)光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息,。待測成分的光譜與對照品的光譜的相似度可用于輔助定性分析。二極管陣列檢測器開啟一定波長范圍的掃描功能時(shí),，可以獲得更多的信息,，包括色譜信號、時(shí)間,、波長的三維色譜光譜圖,，既可用于輔助定性分析，還可用于峰純度分析,。
同樣應(yīng)注意,，兩個(gè)光譜不同的色譜峰表征了不同化合物,，但兩個(gè)光譜相似的色譜峰未必可歸屬為同一化合物。
③利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息定性
利用質(zhì)譜檢測器提供的色譜峰分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)的信息進(jìn)行定性分析,，可獲得比僅利用保留時(shí)間或增加光譜相似性進(jìn)行定性分析更多的,、更可靠信息，不僅可用于已知物的定性分析,，還可提供未知化合物的結(jié)構(gòu)信息,。
2、定量分析
①內(nèi)標(biāo)法
按品種正文項(xiàng)下的規(guī)定,，精密稱(量)取對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì),，分別配成溶液，各精密量取適量,，混合配成校正因子測定用的對照溶液,。取一定量進(jìn)樣，記錄色譜圖,。測量對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高,，按下式計(jì)算校正因子：
再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，進(jìn)樣,，記錄色譜圖,，測量供試品中待測成分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量：
采用內(nèi)標(biāo)法,，可避免因樣品前處理及進(jìn)樣體積誤差對測定結(jié)果的影響,。
②外標(biāo)法
按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,，精密稱(量)取對照品和供試品，配制成溶液,，分別精密取一定量,，進(jìn)樣，記錄色譜圖,，測量對照品溶液和供試品溶液中待測物質(zhì)的峰面積(或峰高),，按下式計(jì)算含量：
式中各符號意義同上。
當(dāng)采用外標(biāo)法測定時(shí),，以手動進(jìn)樣器定量環(huán)或自動進(jìn)樣器進(jìn)樣為宜,。
③加校正因子的主成分自身對照法
測定雜質(zhì)含量時(shí),，可釆用加校正因子的主成分自身對照法,。在建立方法時(shí)，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,，精密稱(量)取待測物對照品和參比物質(zhì)對照品各適量,，配制待測雜質(zhì)校正因子的溶液,，進(jìn)樣，記錄色譜圖,，按下式計(jì)算待測雜質(zhì)的校正因子,。
也可精密稱(量)取主成分對照品和雜質(zhì)對照品各適量，分別配制成不同濃度的溶液,，進(jìn)樣,，記錄色譜圖，繪制主成分濃度和雜質(zhì)濃度對其峰面積的回歸曲線,，以主成分回歸直線斜率與雜質(zhì)回歸直線斜率的比計(jì)算校正因子,。
校正因子可直接載入各品種項(xiàng)下，用于校正雜質(zhì)的實(shí)測峰面積,，需作校正計(jì)算的雜質(zhì),，通常以主成分為參比，采用相對保留時(shí)間定位,，其數(shù)值一并載入各品種項(xiàng)下,。
測定雜質(zhì)含量時(shí)，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度,，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤?，作為對照溶液，進(jìn)樣,，記錄色譜圖,，必要時(shí)，調(diào)節(jié)縱坐標(biāo)范圍(以噪聲水平可接受為限)使對照溶液的主成分色譜峰的峰高約達(dá)滿量程的 10%~25%,。除另有規(guī)定外,，通常含量低于 0.5%的雜質(zhì)，峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)小于 10%,；含量在 0.5%~2%的雜質(zhì),，峰面積測量值的 RSD 應(yīng)小于 5%；含量大于 2%的雜質(zhì),，峰面積測量值的 RSD 應(yīng)小于 2%,。然后，取供試品溶液和對照溶液適量,，分別進(jìn)樣,。除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間,，應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍,，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，計(jì)算各雜質(zhì)含量,。
④不加校正因子的主成分自身對照法
測定雜質(zhì)含量時(shí),，若無法獲得待測雜質(zhì)的校正因子，或校正因子可以忽略,，也可采用不加校正因子的主成分自身對照法,。同上述(3)法配制對照溶液、進(jìn)樣,、調(diào)節(jié)縱坐標(biāo)范圍和計(jì)算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差后,，取供試品溶液和對照品溶液適量，分別進(jìn)樣,。除另有規(guī)定外,，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的 2 倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對照溶液主成分的峰面積比較,，依法計(jì)算雜質(zhì)含量,。
⑤面積歸一化法
按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，配制供試品溶液,，取一定量進(jìn)樣,，記錄色譜圖。測量各峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積,，計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分率,。用于雜質(zhì)檢查時(shí)，由于儀器響應(yīng)的線性限制,，峰面積歸一化法一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查,。
如適用，也可使用其他方法如標(biāo)準(zhǔn)曲線法等,，并在品種正文項(xiàng)下注明,。
四、多維液相色譜
多維色譜又稱為色譜/色譜聯(lián)用技術(shù),，是采用匹配的接口將不同分離性能或特點(diǎn)的色譜連接起來,，第一級色譜中未分離開或需要分離富集的組分由接口轉(zhuǎn)移到第二級色譜中，第二級色譜仍需進(jìn)一步分離或分離富集的組分,，也可以繼續(xù)通過接口轉(zhuǎn)移到第三級色譜中。理論上,，可以通過接口將任意級色譜串聯(lián)或并聯(lián)起來,，直至將混合物樣品中所有的難分離、需富集的組分都分離或富集之,。但實(shí)際上,，一般只要選用兩個(gè)合適的色譜聯(lián)用就可以滿足對絕大多數(shù)難分離混合物樣品的分離或富集要求。因此，一般的色譜/色譜聯(lián)用都是二級,，即二維色譜,。
在二維色譜的術(shù)語中，1D 和 2D 分別指一維和二維,；而 1D 和 2D 則分別代表第一維和第二維,。
二維液相色譜可以分為差異顯著的兩種主要類型：中心切割式二維色譜(heart-cutting mode two-dimensional chromatography)和全二維色譜(comprehensive two-dimensional chromatography)。中心切割式二維色譜是通過接口將前一級色譜中某一(些)組分傳遞到后一級色譜中繼續(xù)分離,，一般用 LC-LC(也可用 LC+LC)表示,；全二維色譜是通過接口將前一級色譜中的全部組分連續(xù)地傳遞到后一級色譜中進(jìn)行分離，一般用 LC×LC 表示,。此外,，這兩種類型下還有若干子類，包括選擇性全二維色譜(sLC×LC)和多中心切割 2D-LC(mLC-LC),。
LC-LC 或 LC×LC 兩種二維色譜可以是相同的分離模式和類型,，也可以是不同的分離模式和類型。接口技術(shù)是實(shí)現(xiàn)二維色譜分離的關(guān)鍵之一,，原則上,，只要有匹配的接口，任何模式和類型的色譜都可以聯(lián)用,。
與一維色譜一樣,，二維色譜也可以和質(zhì)譜、紅外和核磁共振等聯(lián)用,。
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