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藥品質(zhì)量檢測方法:紫外-可見分光光度法
2022年08月24日 08:54:47 來源:化工儀器網(wǎng) 作者:羊舌木 點擊量:13427

紫外-可見分光光度法是在190~800nm波長范圍內(nèi)來測定物質(zhì)的吸光度,用于鑒別,、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法,。

  【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】紫外-可見分光光度法是在190~800nm波長范圍內(nèi)來測定物質(zhì)的吸光度,用于鑒別,、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法,。同時也是一種是涵蓋臨床檢驗在內(nèi)的價廉、快速,、高靈敏度的常用定量分析方法之一。利用被測物質(zhì)對光的吸收特征和吸收強度,,對物質(zhì)進行定性,、定量分析的一種分析方法,是在比色的基礎(chǔ)上所發(fā)展起來的,。紫外-可見分光光度法廣泛用于金屬,、合金,、鋼鐵、化工產(chǎn)品,、生物材料,、食品、臨床和環(huán)境樣品以及藥物中微量無機物和有機物的測定,。
 
  描述物質(zhì)分子對輻射的吸收程度隨波長變化的函數(shù)關(guān)系曲線即為吸收光譜,,物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。當光穿過被測物質(zhì)溶液時,,物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長不同而變化,,因此能夠通過測定物質(zhì)在不同波長處的吸光度,來繪制其吸光度與波長的關(guān)系圖即得被測物質(zhì)的吸收光譜,。
 
  從吸收光譜中,,可以確定最大吸收波長λmax和最小吸收波長λmin,隨后即可通過特定波長范圍內(nèi)樣品的光譜與對照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較,,或通過確定最大吸收波長,,或通過測量兩個特定波長處的吸光度比值而鑒別物質(zhì)。在用于定量時,,在最大吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度,,并與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。
 
  以下是在使用紫外-可見分光光度法時對溶劑,、測定方以及儀器方面的要求及校正和檢定,。
 
  使用紫外-可見分光光度法時對溶劑的要求
 
  1.當有機溶劑含有雜原子時,通常具有很強的末端吸收,。因此,,要將其當作溶劑使用時,它們的使用范圍均不能小于截止使用波長,,例如甲醇,、乙醇的截止使用波長為205nm;
 
  2.當溶劑不純時,,可能會增加干擾吸收,。因此,在測定供試品前,,應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求,,即將溶劑置1cm石英吸收池中,以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質(zhì))測定其吸光度,;
 
  3.溶劑和吸收池的吸光度要求在220~240nm范圍內(nèi)不得超過0.40,,在241~250nm范圍內(nèi)不得超過0.20,在251~300nm范圍內(nèi)不得超過0.10,,在300nm以上時不得超過0.05,。
 
  測定時的注意事項
 
  1.在測定時,,通常需以配置供試品溶液的同批溶劑為空白對照,使用1cm的石英吸收池,,在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點的吸光度,,或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確,。并且吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi),,并以吸光度最大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸光度讀數(shù),,以在0.3~0.7之間為宜,;
 
  2.儀器的狹縫波帶寬度宜小于供試品吸收帶的半高寬度的1/10,否則測得的吸光度會偏低,,因此選擇狹縫寬度的時候,,應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增大為準;
 
  3.由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,,在測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù),,或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計算含量;
 
  4.當溶液的pH值對測定結(jié)果有影響時,,應(yīng)將供試品溶液的pH值和對照品溶液的pH值調(diào)成一致,。
 
  測定法含量檢測一般有對照品比較法吸收系數(shù)法,、計算分光光度法以及比色法,。
 
  1.對照品比較法:按各品種項下的方法,分別配制供試品溶液和對照品溶液,,對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的100%±10%,,所用溶劑也應(yīng)完全一致,在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后,,按下式計算供試品中被測溶液的濃度:cx=(Ax/Ar)cr,。式中cx為供試品溶液的濃度;Ax為供試品溶液的吸光度,;cr為對照品溶液的濃度,;Ar為對照品溶液的吸光度。
 
  2.吸收系數(shù)法:按各品種項下的方法配制供試品溶液,,在規(guī)定的波長處測定其吸光度,,再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時,,吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100,,并注意儀器的校正和檢定。
 
  3.計算分光光度法:計算分光光度法有多種,使用時應(yīng)按各品種項下規(guī)定的方法進行,。當吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時,波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響,,故對照品和供試品的測試條件應(yīng)盡可能一致,。計算分光光度法一般不宜用作含量測定。
 
  4.比色法:供試品本身在紫外-可見光區(qū)沒有強吸收,,或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度,,可加入適當?shù)娘@色劑,使反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收移至可見光區(qū),,這種測定方法稱為比色法,。用比色法測定時,應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照品溶液,,用溶劑補充至同一體積,,顯色后,以相應(yīng)試劑為空白,,在各品種規(guī)定的波長處測定各份溶液的吸光度,,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標繪制標準曲線,,再根據(jù)供試品的吸光度在標準曲線上查得其相應(yīng)的濃度,,并求出其含量。也可取對照品溶液與供試品溶液同時操作,,顯色后,,以相應(yīng)的試劑為空白,在各品種規(guī)定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸光度,,按對照品比較法計算供試品溶液的濃度,。
 
  使用紫外-可見分光光度法的儀器校正及檢定
 
  1. 波長:由于環(huán)境因素對機械部分的影響,儀器的波長經(jīng)常會略有變動,,因此除應(yīng)定期對所用的儀器進行全面校正檢定外,,還應(yīng)于測定前校正測定波長。儀器波長的允許誤差為:紫外光區(qū)±lnm,,500nm附近±2nm,。
 
  (1)常用汞燈中的較強譜線237.83nm,253.65nm,,275.28nm,,296.73nm,313.16nm,,334.15nm,,365.02nm,404.66nm,435.83nm,,546.07nm與576.96nm,;
 
  (2)用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正;
 
  (3)鈥玻璃在波長279.4nm,,287.5nm,,333.7nm,360.9nm,,418.5nm,,460.0nm,484.5nm,,536.2nm與637.5nm處有尖銳吸收峰,,也可作波長校正用,需注意鈥玻璃會因來源不同或隨著時間的推移會有微小的變化,;
 
  (4)高氯酸鈥溶液校正雙光束儀器以10%高氯酸溶液為溶劑,,配制含氧化鈥(Ho2O3)4%的溶液,該溶液的吸收峰波長為241.13nm,,278.10nm,,287.18nm,333.44nm,,345.47nm,,361.31nm,416.28nm,,451.30nm,,485.29nm,536.64nm和640.52nm,。
 
  2.吸光度的準確度:可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定,。取在120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg,精密稱定,,用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml,,在規(guī)定的波長處測定并計算其吸收系數(shù),并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較,,應(yīng)符合表中的規(guī)定,。
 
  3.雜散光的檢查:可按下表所列的試劑和濃度,配制成水溶液,,置1cm石英吸收池中,,在規(guī)定的波長處測定透光率,應(yīng)符合表中的規(guī)定,。
 
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