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微流控與質(zhì)譜聯(lián)用 我國(guó)研究團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析新技術(shù)
2022年06月23日 09:57:02
來(lái)源：化工儀器網(wǎng) 作者：宋池 點(diǎn)擊量：4476
近日，深圳灣實(shí)驗(yàn)室團(tuán)隊(duì)與中科院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院醫(yī)工所團(tuán)隊(duì)合作,，將微流控與自上而下質(zhì)譜在線聯(lián)用,，在解析蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)表征方面取得進(jìn)展。
【化工儀器網(wǎng) 項(xiàng)目成果】近日,，深圳灣實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞分析研究所質(zhì)譜團(tuán)隊(duì)與中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院醫(yī)工所生物醫(yī)學(xué)光學(xué)與分子影像研究中心微流控團(tuán)隊(duì)合作,，將微流控與自上而下質(zhì)譜(top-down mass spectrometry)在線聯(lián)用，在解析蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)表征方面取得進(jìn)展。研究成果發(fā)表于Analytical Chemistry期刊,。
蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ),，也是生命活動(dòng)的承擔(dān)者，因此蛋白質(zhì)研究是生物學(xué)的重要內(nèi)容,。蛋白質(zhì)由20種不同的氨基酸通過(guò)肽鍵連接成線性高分子鏈,，具有特殊的三維空間結(jié)構(gòu)。其生物功能與結(jié)構(gòu)動(dòng)力學(xué)特征緊密相關(guān),。不同結(jié)構(gòu)運(yùn)動(dòng)模式?jīng)Q定了蛋白質(zhì)在生化過(guò)程中的不同生物功能,。對(duì)于研究蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能和潛在機(jī)制來(lái)說(shuō)，表征蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)至關(guān)重要,。
與通過(guò)高通量DNA測(cè)序快速積累蛋白質(zhì)序列相比,，表征蛋白質(zhì)的3D結(jié)構(gòu)目前依然非常困難。研究團(tuán)隊(duì)涉及了一種微流控芯片-質(zhì)譜聯(lián)用設(shè)計(jì)方案：Top-Down and Kinetic MS-chip(TDK-MS chip)用于對(duì)蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)學(xué)進(jìn)行自上而下質(zhì)譜在線分析,。
自下而上(bottom-up)和自上而下(top-down)是兩種基于生物質(zhì)質(zhì)譜分析的蛋白質(zhì)組學(xué)方法,。其中蛋白質(zhì)組學(xué)研究中廣泛使用的是自下而上法，即鳥(niǎo)槍法,。該方法是將大蛋白片段水解/酶解為肽段,，然后進(jìn)行分析。而自上而下法主要用于表征混合物中的多個(gè)完整蛋白,。該方法在蛋白質(zhì)鑒定,、分析、序列分析和翻譯后修飾表征方面有很大潛力,。與非變性質(zhì)譜結(jié)合分析蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和亞基類(lèi)型以及修飾,；與氫/氘交換質(zhì)譜結(jié)合可為構(gòu)象或結(jié)合界面分析提供更高的空間分辨率，并實(shí)現(xiàn)構(gòu)象特異性表征,。
微流控芯片技術(shù)將樣品制備,、反應(yīng)、分離和檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)室的基本功能縮微到一個(gè)幾平方厘米芯片上,，可為相應(yīng)流程所需的前端反應(yīng)提供多反應(yīng)物的操控靈活性,、多功能模塊集成化和自動(dòng)化等功能。
TDK-MS chip方案可用于時(shí)間分辨的非變性自上而下質(zhì)譜和氫/氘交換自上而下質(zhì)譜分析,，能夠?qū)崿F(xiàn)完整蛋白及其復(fù)合物的高效離子化,，靈活操控多種反應(yīng)物液流，提供較寬的流速調(diào)控范圍,，并可在 nL/min 量級(jí)精確控制蛋白反應(yīng)時(shí)間,。研究團(tuán)隊(duì)在實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證了該方案對(duì)單克隆抗體、抗體-抗原復(fù)合物,、共存蛋白質(zhì)構(gòu)象異構(gòu)體等多個(gè)體系的高級(jí)結(jié)構(gòu)分析結(jié)果,。
該方案的成功開(kāi)發(fā)為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和動(dòng)力學(xué)研究提供了一種更有效的方法,，有利于蛋白質(zhì)組學(xué)研究的進(jìn)一步深入，為生物學(xué)前沿研究提供了有力幫助,。
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