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關(guān)于熒光顯微鏡的原理極其介紹
2020年07月09日 15:29:47
來源：化工儀器網(wǎng) 點擊量：6210
熒光顯微鏡是一種以紫外線為光源,，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光,，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置的儀器,。
【化工儀器網(wǎng) 技術(shù)指導(dǎo)】熒光顯微鏡是一種以紫外線為光源,，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光,，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置的儀器,。
熒光顯微鏡通常被用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸,、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等,。細胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等,，受紫外線照射后可發(fā)熒光,；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。
熒光顯微鏡的原理和結(jié)構(gòu)特點：
熒光顯微鏡是利用一個高發(fā)光效率的點光源,，經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍光4200入)作為激發(fā)光,、激發(fā)標本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察,。這樣在強烈的對襯背景下,，即使熒光很微弱也易辨認，敏感性高,，主要用于細胞結(jié)構(gòu)和功能以及化學(xué)成分等的研究,。
熒光顯微鏡的基本構(gòu)造是由普通光學(xué)顯微鏡加上一些附件(如熒光光源、激發(fā)濾片,、雙色束分離器和阻斷濾片等)的基礎(chǔ)上組成的,。熒光光源——般采用超高壓汞燈(50一200W)，它可發(fā)出各種波長的光,，但每種熒光物質(zhì)都有一個產(chǎn)生*強熒光的激發(fā)光波長,，所以需加用激發(fā)濾片(一般有紫外、紫色,、藍色和綠色激發(fā)濾片),，僅使一定波長的激發(fā)光透過照射到標本上，而將其他光都吸收掉,。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后,，在極短時間內(nèi)發(fā)射出較照射波長更長的可見熒光。熒光具有專一性,，一般都比激發(fā)光弱,，為能觀察到專一的熒光，在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片,。
它的作用有二：一是吸收和阻擋激發(fā)光進入目鏡,、以免于擾熒光和損傷眼睛,，二是選擇并讓特異的熒光透過，表現(xiàn)出專一的熒光色彩,。兩種濾光片必須選擇配合使用,。
熒光顯微鏡就其光路來分有兩種：
1.透射式熒光顯微鏡：激發(fā)光源是通過聚光鏡穿過標本材料來激發(fā)熒光的。常用暗視野集光器,，也可用普通集光器,，調(diào)節(jié)反光鏡使激發(fā)光轉(zhuǎn)射和旁射到標本上。這是比較舊式的熒光顯微鏡,。其優(yōu)點是低倍鏡時熒光強,，而缺點是隨放大倍數(shù)增加其熒光減弱.所以對觀察較大的標本材料較好。
2.落射式熒光顯微鏡這是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡,，與上不同處是激發(fā)光從物鏡向下落射到標本表面,，即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個雙色束分離器,，它與光鈾呈45,。角，激發(fā)光被反射到物鏡中,，并聚集在樣品上,，樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進入物鏡,，反回到雙色束分離器,，使激發(fā)光和熒光分開,，殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收,。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊，可滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要,。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點是視野照明均勻,，成像清晰，放大倍數(shù)愈大熒光愈強,。
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