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色譜法又稱(chēng)色層法或?qū)游龇ǎ且环N物理化學(xué)分析方法,，它利用不同溶質(zhì)(樣品)與固定相和流動(dòng)相之間的作用力(分配、吸附,、離子交換等)的差別,，當(dāng)兩相做相對(duì)移動(dòng)時(shí)，各溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行多次平衡,，使各溶質(zhì)達(dá)到相互分離,。

色譜法的分類(lèi)方法很多，通常是根據(jù)流動(dòng)相的狀態(tài)將色譜法分成四大類(lèi)(表3-2）。

基本原理

色譜法,，又稱(chēng)層析法,。根據(jù)其分離原理，有吸附色譜,、分配色譜,、離子交換色譜與排阻色譜等方法。

吸附色譜是利用吸附劑對(duì)被分離物質(zhì)的吸附能力不同,，用溶劑或氣體洗脫,，以使組分分離。常用的吸附劑有氧化鋁,、硅膠,、聚酰胺等有吸附活性的物質(zhì)。

分配色譜是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)不同,，以使組分分離,。其中一相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上,，稱(chēng)固定相,；另一相為液體或氣體，稱(chēng)流動(dòng)相,。常用的載體有硅膠,、硅藻土、硅鎂型吸附劑與纖維素粉等,。

離子交換色譜是利用被分離物質(zhì)在離子交換樹(shù)脂上的離子交換勢(shì)不同而使組分分離。常用的有不同強(qiáng)度的陽(yáng)離子與陰離子交換樹(shù)脂,，流動(dòng)相一般為水或含有有機(jī)溶劑的緩沖液,。

排阻色譜又稱(chēng)凝膠色譜或凝膠滲透色譜，是利用被分離物質(zhì)分子量大小的不同和在填料上滲透程度的不同,，以使組分分離,。常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠,、徽孔聚合物,、微孔硅膠或玻璃珠等，可根據(jù)載體和試樣的性質(zhì),，選用水或有機(jī)溶劑為流動(dòng)相,。

色譜所用溶劑應(yīng)與試樣不起化學(xué)反應(yīng)，并應(yīng)用純度較高的溶劑,。色譜時(shí)的溫度,，豫氣相色譜法或另有規(guī)定外，是指在室溫下操作。

分離后各成分的檢出,，應(yīng)采用各單體中規(guī)定的方法,。通常用柱色譜、紙色譜或蕁層色譜分離有色物質(zhì)時(shí),，可根據(jù)其色帶進(jìn)行區(qū)分,，對(duì)有些無(wú)色物質(zhì)，可在245～365 nm的紫外燈下檢視,。紙色譜或薄層色譜也可噴顯色劑使之顯色,。薄層色譜還可用加有熒光物質(zhì)的薄層硅膠，采用熒光熄滅法檢視,。用紙色譜進(jìn)行定量測(cè)定時(shí),，可將色譜斑點(diǎn)部分剪下或挖取，用溶劑溶出該成分,，再用分光光度法或比色法測(cè)定,；童可用色譜掃描儀直接在紙或薄層板上測(cè)出。柱色譜,、氣相色譜和液相色譜可習(xí)接于色譜柱出口處的各種檢測(cè)器檢測(cè),。柱色譜還可分部收集流出液后用適宜方法翼定。柱色譜法所用色譜管為內(nèi)徑均勻,、下端縮口的硬質(zhì)玻璃管,，下端用棉花或玻葺纖維塞住，管內(nèi)裝有吸附劑,。色譜柱的大小,，吸附劑的品種和用量，以及洗脫時(shí)西流速,，均按各單體中的規(guī)定,。吸附劑的顆粒應(yīng)盡可能保持大小均勻，以保證良好的分離效果,，除另有規(guī)定外通常多采用直徑為0．07～0．15mm的顆粒,。吸附劑的活性或吸附力對(duì)分離效果有影響，應(yīng)予注意,。

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