上海得力生物科技有限公司

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人β2糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）
使用說(shuō)明書
僅供科研使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。
使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書,。
用途： 用于定量檢測(cè)人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中β2 糖蛋白Ⅰ（β2GP
Ⅰ）的含量,。
工作原理
本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），測(cè)定樣品中人β2 糖
蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）的水平。向預(yù)先包被人β2 糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）抗體的酶
標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品,、待測(cè)樣本和HRP 標(biāo)記的β2 糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）抗體，
經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的組分,，然后再加入底物A、B,，產(chǎn)生藍(lán)色,，并在
酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人β2 糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）
的濃度呈正相關(guān),。
試劑盒組成
1 標(biāo)準(zhǔn)品（50ug/ml） 0.5ml 7 顯色劑A 液3ml
2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3mL 8 顯色劑B 液3ml
3 酶標(biāo)包被板12 孔×4 條9 終止液3ml
4 酶標(biāo)試劑3ml 10 說(shuō)明書1 份
5 20×濃縮洗滌液15ml 11 封板膜2 張
6 樣品稀釋液3ml 12 密封袋1 個(gè)
注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：50,、25、12.5,、6.25,、3.12、0 ug/ml
需要而未提供的試劑和器材
1． 37℃恒溫箱,。
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,。
3． 精密移液器及一次性吸頭
4． 蒸餾水，
5． 一次性試管
6． 吸水紙
注意事項(xiàng)
1． 從2-8℃取出的試劑盒,，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30 分鐘,。酶標(biāo)
包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差
3． 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本都做雙份檢測(cè),。
4． 嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
5． 為避免交叉污染,，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜,。
6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
7． 底物B 對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下
用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml 注入孔內(nèi),，浸泡1-2 分鐘,。根據(jù)需
要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次,。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中
標(biāo)本要求
1．不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活
性,。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)
驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作程序
1． 分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)
準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,；在酶標(biāo)
包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為5 倍）,。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混
勻,，37℃溫育60 分鐘。
2． 棄去液體,，甩干,，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30 秒,，甩去洗滌液,，用吸
水紙拍干。如此重復(fù)5 次,，拍干,。
3． 每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光
顯色15 分鐘.
4． 取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
5． 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值（OD 值）。測(cè)
定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
6． 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)
樣品的OD 值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟
件來(lái)計(jì)算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
準(zhǔn)備試劑,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品,、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘
洗板5次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計(jì)算
檢測(cè)范圍：1.56ug/ml-50ug/ml,。
規(guī)格： 48T/盒
保存： 2-8℃
有效期： 6 個(gè)月（2-8℃）,。