大鼠胰脂肪酶（PL）elisa指標(biāo)檢測(cè)試劑盒（北京elisa實(shí)驗(yàn)原理）

一．實(shí)驗(yàn)原理：
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,，又保留酶的活性,。在測(cè)定時(shí),，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi),。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
大鼠胰脂肪酶（PL）elisa指標(biāo)檢測(cè)試劑盒（北京elisa實(shí)驗(yàn)原理）

二．實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1.儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘）,，微量加液器,、吸頭、蒸餾水或去離子水,，濾紙,。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。
三．樣品收集,、處理及保存
1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。
2）細(xì)胞：
用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,，通過(guò)反復(fù)凍融,，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測(cè),。
3）血清：
在室溫下，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測(cè)。
4）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。
5）體液：
包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。
6.）組織標(biāo)本：
切取組織標(biāo)本,，稱(chēng)取重量0.5mg，加入500ul 的PBS,，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘,，收集上清進(jìn)行檢測(cè),。
樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。
7）保存：
如果樣品不能立即檢測(cè),，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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